基于化学振荡动力学检测的酶联免疫诊断技术

在发现系列低表观自由能、高重现性、高频化学振荡反应体系后，利用该体系建立了高频化学振荡动力学检测法，它对多类物质检测的灵敏度既高于经典的化学振荡分析法也远高于分光光度法。申请人以此为基础，首次将高频化学振荡动力学检测引入疾病诊断领域，将高灵敏度的化学振荡检测和高度特异性的酶联免疫诊断技术巧妙地结合起来，以化学振荡法代替分光光度法，检测酶联免疫分析中底物及其产物浓度的变化，从而创建基于高频化学振荡动力学检测的酶联免疫诊断技术。课题将研究检测原理、试剂、步骤、定性定量依据、影响因素及其消除方案，建立化学振荡检测的间接法、双夹心法、竞争法的酶联免疫诊断技术，对疾病进行高灵敏度、高敏感度、高特异性、简单、快速检测。课题的深入研究将为疾病的防控及早期诊断提供有力的技术支持，为酶联免疫法和化学振荡检测技术进步提供新的动力，也将对非线性化学、分子生物学等相关科学的发展产生积极影响。

获得国家基金委资助后，课题组严格地实施课题计划并完成了计划书中所列各项任务。 建立了适合与酶联免疫诊断结合的振荡寿命长、衰减低、重现性好的以葡萄糖为底物、大环酮为催化剂的B-Z体系，发现了一种从未报道过的高达706.09mV振幅的化学振荡体系。在影响因素分析中发现了强紫外光对H2SO4-NaBrO3-丙酮-葡萄糖体系化学振荡的干扰，为防止干扰提供了理论基础。筛选了酶催化底物，建立了对乙酰胺基酚、苯酚磷酸酯和维生素C磷酸酯的化学振荡动力学检测方法，实现了对胰岛素和菌体蛋白的多途径化学振荡检测。建立以苹果酸为底物的微量B-Z化学振荡，测定碱性磷酸酶检出限为0.59 U/L(3δ)； 运用葡萄糖-丙酮为底物的微量B-Z化学振荡检测体系，对碱性磷酸酶最低检测限为0.57 U/L。 用双夹心法-化学振荡联立对胰岛素的测定，用苹果酸体系的微量B-Z化学振荡对胰岛素进行检测，最低检测限为1.85*10-10 g/L。 用亲和素-生物素法和碱性磷酸酶标记抗体进行酶联免疫检测，检测限为1.90*10-10 g/L，微量体系的灵敏度比常规体积检测提高了40倍。用胰岛素抗体-胰岛素-胰岛素抗体-碱性磷酸酯酶双夹心法测定胰岛素，其灵敏度可以达到0.1ng，远高于分光光度法的酶联免疫检测。用双夹心-生物素-亲和素方法测定胰岛素，其灵敏度高达0.05ng，与放射免疫的灵敏度相近。将化学振荡体系与双抗体夹心ELISA方法相结合，对金黄色葡萄球菌蛋白检出限为1.0597×10-6g/L， 运用生物素-亲和素酶联免疫分析检测，最低检出限为1.5636×10-8g/L。在以前所有研究中只是单纯地运用化学振荡对小分子进行检测，而酶联免疫结合B-Z化学振荡分析首次实现了蛋白质大分子的检测，为疾病诊断提供了新的选择。 课题组建立了酶联免疫结合B-Z化学振荡分析测定理论，以此理论为基础，发明了“一种高灵敏度酶联免疫吸附分析方法”，已获得国家发明专利。研究共发表国际论文10篇,其中SCI收录6篇,EI收录一篇,国际会议论文1篇,国内会议论文一篇,专著一部。