舍格伦综合征M3受体抗体对唾液腺紧密连接蛋白调控及其机制的研究

Sjogren's syndrome (SS) is an autoimmune disease characterized by infiltration of lymphocytes of exocrine glands, which could result in dry mouth and dry eyes. Multiple organs could also be involved in the later phase of this disease. Usually the patients present low efficiency to therapy, since the pathogenesis of SS is unclear. The aim of this study is to investigate the salivary gland tight juncion of SS patients and healthy controls and the regulation of tight junction by anti-M3R autoantibody, so as to further understand the mechanisms of dry mouth in SS.

舍格伦综合征（Sj?gren's Syndrome，SS）又称干燥综合征，是一种累及多器官、多系统的全身性自身免疫病，也是唾液腺最具代表性的自身免疫性疾病。ＳＳ病变特征为机体产生大量的自身抗体而导致外分泌腺体破坏及功能障碍。临床上以口干、眼干为典型特征,影响患者生活质量，严重者因合并多系统损害或伴发淋巴瘤而危及生命。现阶段该病尚无理想的治疗方法，究其原因主要在于目前对于SS患者唾液分泌减少的发病机制尚未不清楚，难以采取有针对性的措施来治疗。本研究拟以SS患者唾液腺紧密连接为重点（1）观察唾液腺紧密连接蛋白分子表达、分布及mRNA表达水平，并与健康对照组比较，观察在SS唾液腺中的病理变化，以阐明紧密连接变化在SS发病中的作用。（2）使用抗M3受体抗体处理离体培养的唇腺上皮细胞及下颌下腺细胞，观察紧密连接蛋白分子及其信号转导通路的变化，加深对该病发病机理的理解，为该病治疗提供新的思路。

舍格伦综合征（Sjogren syndrome，SS）是一种常见的慢性进行性自身免疫系统疾病，病理学上主要表现为腺体淋巴细胞浸润。临床上则表现为外分泌腺进行性分泌障碍，患者多出现口干、眼干等症状。紧密连接（Tight junction，TJ）是上皮细胞间重要连接复合体之一，主要由跨膜蛋白和胞浆蛋白构成，是物质经旁细胞途径转运的重要通路，其正常功能的发挥对唾液分泌至关重要。自身抗体的出现是SS重要诊断标准之一。抗M3受体抗体是目前发现的与唾液分泌密切相关的自身抗体。此外，炎症因子水平失衡是SS重要表现之一。近年研究发现，白介素（Interleukin，IL）-17在SS患者体内表达显著升高，但其在SS起病中的作用尚不明确。本课题主要研究抗M3受体抗体及IL-17对唾液腺紧密连接的影响，从而探索其与唾液腺分泌功能障碍之间的联系。NOD小鼠与年龄性别相匹配的Balb/c小鼠作为本课题的动物模型。研究发现，SS患者唇腺上皮细胞中,紧密连接蛋白的表达和分布发生明显变化。然而，抗M3受体抗体直接孵育人下颌下腺组织块或大鼠唾液腺上皮细胞系（SMG-C6）均未见紧密连接分子表达和分布发生改变。动物实验方面，在NOD小鼠的下颌下腺中，出现明显的淋巴细胞浸润灶，紧密连接的宽度明显增加。同时IL-17表达水平显著升高，紧密连接蛋白claudin-1，3，4, occludin及ZO-1均出现表达水平的失调。然而，在NOD小鼠腮腺中未见以上改变。IL-17直接孵育Balb/c小鼠下颌下腺和腮腺组织块，可见紧密连接分子的表达和分布均发生显著改变。同时，IL-17能够显著增加唾液腺上皮细胞中p-IκBα及p65的表达，然而预孵育NF-κB系统的抑制剂能显著抑制IL-17的以上作用。以上结果显示，目前尚无充分证据表明抗M3受体抗体与SS患者唾液腺紧密连接结构破坏相关。然而IL-17可以通过破坏紧密连接的完整性而影响唾液分泌的过程，造成唾液腺分泌功能的障碍。