黑酵母样真菌的毒力和致病性研究

Mutilating black yeast infections are more often and severe in china than the other place of the world. It has aroused worldwide attention due to its involving patients without immunodeficiency. To study pathogenicity and virulence in black yeasts and relatives, We will investigate the virulence, a number of factors supposedly involved in these pathogenesis processes to find out the relationgship between virulence and supposed virulence factors. the chicken embryo model will be used to determine the virulence potential of the different bleast yeast and relatives species, The supposed virulence factors, such as the oxidation of fenolic compounds determined by activity of laccase and homogentisate dioxygenase, and the ability to convert to muriform cells in vitro at low pH, will be monitored phenetically; At the genetic level, the genes Lac, Hgd, Cdc42 which are associated with those supposed virulence factors will be sequenced and compared with sister species by moti-locus phylogenetic tree to verify whether essential evolutionary changes have taken place from plant to human. Aim of this study is to find out pathogenicity and virulence in black yeasts and relatives, specially the characteristics in bleast yeast and relatives species isolated from china.

我国黑酵母样真菌感染与世界其它地区相比更为常见，可感染健康者，临床死亡率很高而引起许多学者关注。为阐明黑酵母样真菌尤其中国致病菌株的毒力和致病性，本研究将从两方面探讨黑酵母样真菌的毒力与可能毒力因子即同化芳香烃化合物的能力和裂殖体转化能力之间的关系。首先，采用鸡胚胎模型观察黑酵母样真菌感染鸡胚胎后的存活时间以评价黑酵母样真菌的毒力；通过检测黑酵母样真菌漆酶和黑尿酸脱氢酶活性评价其同化芳香烃化合物能力；黑酵母样真菌裂殖体转化能力通过体外低pH值液基诱导方法评价。以此，从生化角度探讨黑酵母样真菌的毒力与这些可能毒力因子之间的关系。进一步，在黑酵母样真菌中扩增与毒力因子相关的Lac,Hgd,Cdc42基因，建立多基因系统发育树，从分子进化角度，揭示这些毒力因子相关基因在致病与非致病性黑酵母样真菌中的进化特点，以期阐明黑酵母样真菌的致病机理，为黑酵母样真菌感染的早期诊断治疗提供依据。

我国黑酵母样真菌感染与世界其它地区相比更为常见，可感染健康者，临床死亡率很高而引起许多学者关注。为阐明黑酵母样真菌尤其中国致病菌株的毒力和致病性，我们进行了对不同黑酵母样真菌菌种间和菌株间毒力的比较研究建立黑酵母样真菌感染蜡蛾模型，采用Cladophialophora carrionii建立蜡蛾感染模型。同时将Cladophialophora carrionii环境株，致病菌株及姐妹菌种分别感染蜡蛾，观察感染蜡蛾的存活时间，评价不同菌种间和菌株间毒力差异。同时在DNA水平，观察黑酵母样真菌菌种间和菌株间可能毒力因子相关基因的系统进化特点，30株黑酵母样真菌的DNA进行直接扩增，测序基因I Its,Ef,Bt基因扩增测序，分别建立ITS，BTa，Ef多基因系统发育树（multi-locus）。同时进行AFLP分析得到的AFLP系统发育树与Its,Ef,Bt系统发育树（黑酵母样真菌经典系统发育树）比较。多基因树可以提供给我们致病菌种和非致病菌种间基因的变异，树之间的差别表明每个基因选择的不同和进化的压力，可显示黑酵母样真菌在特异性致病过程中获得丢失或改变的基因。通过黑酵母样真菌不同菌种间和菌株间毒力﹑相关基因进化特点之间的比较研究，以期阐明Chaetothyriales目黑酵母样真菌可能的毒力因子，感染途径，以及其在进化过程中的生态学和致病性的意义。取得的主要研究进展、重要结果、关键数据等及其科学意义或应用前景。本项目是在世界上首次建立蜡蛾模型研究黑酵母样真菌，并通过蜡蛾模型，发现致病菌株与环境菌株及进化亲缘很近的姐妹菌种毒力有显著性差异，致病菌株毒力明显强于环境菌株和姐妹菌种。首次阐明着色芽生菌病致病起源，即起源于非洲，进而在亚洲，南美洲是新近出现，着色霉属引起着色芽生菌病先于卡氏枝孢霉。提出引起原发性脑感染的暗色真菌联合两性霉素B 和氟胞嘧啶可有体外协同作用，推荐临床试用两性霉素B 和氟胞嘧啶联合治疗暗色真菌引起原发性脑感染。