CDK3活化AP-1促进细胞癌变的分子机制研究

本项目拟运用分子动态模拟技术明确CDK3与c-Jun结合的结构域，利用基因突变技术构建含不同结构域的CDK3和c-Jun表达载体，基因转染、免疫共沉淀技术确定CDK3和c-Jun结合的结构域；体外激酶实验、免疫共沉淀和免疫印迹的方法确定CDK3不同结构域对c-Jun磷酸化和AP-1活性的影响；建立含CDK3不同结构域稳定表达细胞系，细胞软琼脂集落形成实验和细胞平板集落形成实验确定这些结构域对细胞转化的影响；裸鼠成瘤实验观察CDK3不同结构域的致瘤性。本项目完成后有望阐明CDK3通过活化AP-1介导癌变的分子机制，为CDK3参与癌变的分子机制研究提供科学的理论依据。

肿瘤是一种细胞周期网络调控异常的疾病，在肿瘤发生、发展过程中各种致病因子致使细胞周期激酶激活，参与细胞癌变。本项目探讨CDK3通过活化AP-1促进细胞癌变的分子机制，以CDK3稳定表达细胞系和BALB/c裸鼠为研究对象，分析CDK3对c-Jun磷酸化、AP-1活性、细胞转化和裸鼠成瘤的作用。结果1）CDK3与c-Jun结合并使其Ser63/73位磷酸化，促进AP-1活性升高；2）CDK3明显促进细胞停泊非依赖性生长，与c-Jun结合能够促进细胞平板集落的形成，表明CDK3能够促进细胞转化；3）将CDK3稳定表达细胞系注射至裸鼠皮下和腹腔，皮下形成的肿瘤重量明显高于对照组，在CDK3稳定表达组的裸鼠肝和肺中发现明显转移灶，表明CDK3促进肿瘤的形成以及可能促进肿瘤的转移。本研究结果初步揭示了CDK3通过活化AP-1促进细胞癌变和肿瘤形成的分子机制，为CDK3参与癌变的分子机制研究提供了科学的理论依据。