新基因CIAPIN1选择性剪接体在胃癌发生发展中的功能研究

CIAPIN1是我科2004年发现的一个新的人类耐药相关基因，我们前期发现CIAPIN1与肿瘤发生、多药耐药和应激反应相关。近期实验发现CIAPIN1存在两个选择性剪接体，但在胃癌发生发展中的作用尚不清楚。本项目将在我们前期工作基础上，利用RT-PCT检测CIAPIN1剪接体在胃癌组织和细胞中的表达，EGFP融合蛋白表达检测亚细胞定位，分析不同剪接体表达水平与胃癌临床病理资料之间的相关性，采用真核表达基因转染研究CIAPIN1剪接体对胃癌恶性生物学表型的影响，借助TAP方法和飞行时间质谱研究CIAPIN1不同剪接体的相互作用分子，借助基因芯片和抗体芯片寻找CIAPIN1不同剪接体的下游调控分子；对所获得的高通量信息进行分析和归类，寻找CIAPIN1不同剪接体参与胃癌调控的信号通路，从而较充分的揭示CIAPIN1及其不同剪接体介导胃癌发生发展的机制，为胃癌的防治打下更好的基础。

CIAPIN1是我科于2000年报道的一个新的人类胃癌耐药相关基因，也是RAS信号通路下细胞因子诱导凋亡的调控分子之一。目前国内外关于CIAPIN1调控肿瘤发生发展的文献结果存在巨大差异：部分报道CIAPIN1抑制肿瘤发生发展，部分报道CIAPIN1促进肿瘤发生发展。我们近期研究结果显示：CIAPIN1存在两个选择性剪接体，但其功能尚不清楚、其与胃癌的关系更未见报道。本项目正是在我们上述工作基础上，首先利用PCR方法检测 CIAPIN1 剪接体在胃癌组织的表达分布，及其表达水平与胃癌临床病理资料之间的相关性，我们发现CIAPIN1α在胃癌组织中高表达，并与胃癌增殖、TNM分期、转移正相关；而CIAPIN1β在胃癌组织中低表达，并与胃癌增殖、TNM分期、转移负相关和细胞中。体外实验结果显示，CIAPIN1α可促进胃癌细胞增殖、侵袭、转移；药敏实验以及ADR蓄积与潴留实验同样显示，CIAPIN1α促进胃癌细胞耐药的机制之一是加速药物的泵出，减少药物在细胞内的蓄积与潴留；而CIAPIN1β抑制胃癌细胞耐药的机制之一是降低药物的泵出，增加药物在细胞内的蓄积与潴留。侵袭、转移结果显示，CIAPIN1α促进胃癌低转移潜能细胞MKN-28侵袭、转移，而CIAPIN1β可抑制高转移潜能细胞MKN-28M侵袭、转移。进而采用免疫荧光染色和PEGFP-C2亚细胞定位载体转染的方法，我们发现CIAPIN1α主要分布在细胞浆，而CIAPIN1β主要分布在细胞核，两者分布的不同也许与其功能密切相关，但尚有待于进一步研究。在完成上述表型分析的同时，我们采用基因芯片寻找 CIAPIN1 剪接体下游的调控信号通路，筛选获得了部分转移、增殖相关的分子，但由于缺乏CIAPIN1剪接体的特异性抗体，以及在亚细胞定位方面实验进展不顺利，所以，机制方面尚未进行深入的研究，但通过我们上述的研究，基本可以说明，目前国内外关于CIAPIN1调控肿瘤发生发展的文献结果存在巨大差异：如部分报道CIAPIN1抑制肿瘤发生发展，部分报道CIAPIN1促进肿瘤发生发展，该差异结果很大可能是由于CIAPIN1剪接体的存在而导致一开始CIAPIN1基因克隆过程中出现了错误，进而导致早先一些研究结果的巨大差异。