复方蜥蜴散凝胶对PLGC模型大鼠胃肠道微生态平衡及PI3K/Akt/mTOR信号通路的调控作用研究

Pathological changes before gastric cancer (PLGC) for the secondary prevention main stage gastric cancer. Our studies found that the spleen and stomach dysfunction, blood stasis is the main pathogenesis of PLGC, in the legislative Jiedutongluo compound lizards powder can regulate the function of spleen and stomach, interfere with NF- kappa B, Stat3 pathway in PLGC rats, and promote cell apoptosis. The results show that the imbalance of gastrointestinal micro ecosystem can lead to the change of the extracellular environment and the imbalance of blood oxygen homeostasis, activation of PI3K/AkT/mTOR leads to cell proliferation and apoptosis. However, NF- kappa B and Stat3 act on PI3K/AkT/mTOR, which influence the expression of downstream oncogenes. Therefore, we propose a compound lizard gel based on adjusting the function of spleen and stomach, maintenance of gastrointestinal micro ecological balance, intervention of PI3K/Akt/mTOR, inhibition of cell proliferation, blocking the PLGC hypothesis.The aim of this study was to observe the changes of gastrointestinal microbial community in PLGC model rats before and after treatment with DGGE; Envision,western blot and Q-PCR method to observe the effect of PI3K/Akt/mTOR pathway on the prevention of PLGC, test the hypothesis.

胃癌前病变（PLGC）为胃癌二级预防主要阶段。我们发现脾胃功能失调，毒瘀互结是PLGC主要病机，以解毒通络立法的复方蜥蜴散可调整脾胃功能，干预PLGC大鼠NF-κB、Stat3通路，促进细胞凋亡。研究表明，胃肠道微生态失衡可导致细胞外环境改变，血氧稳态失衡，激活PI3K/AkT/mTOR，致细胞增殖凋亡失常。而NF-κB、Stat3共同作用于PI3K/AkT/mTOR，影响下游癌基因表达。因此我们提出复方蜥蜴散凝胶基于调整脾胃功能，维护胃肠道微生态平衡，干预PI3K/Akt/mTOR，抑制细胞增殖，阻断PLGC假说。本项目旨在采用DGGE图谱技术观察该方治疗前后PLGC模型大鼠胃肠道微生物群落变化；Envision、western-blot、Q-PCR法观察该方调控PI3K/Akt/mTOR通路，预防PLGC作用机制，验证假说。

研究PLGC模型大鼠肠道菌群变化，探讨复方蜥蜴散凝胶治疗PLGC的作用机制，以PI3K/Akt/mTOR信号通路及EMT相关因子为桥梁，PLGC模型大鼠肠道微生态为靶点，采用16S rRNA基因分析并结合生物信息学分析，验证中药复方通过对PLGC大鼠模型胃肠道菌群的调节作用，治疗PLGC疾病目的。.将SD雄性大鼠，随机分为空白组和模型组，除空白对照组，模型组大鼠每天以 0.017 mol/L 的 MNNG 溶液，每日按0.5ml/100 g体质量对大鼠灌胃一次，辅助采取2日饱食、1 日饥饿的饥饱失常法，连续12周；空白对照A组大鼠相同条件下自由饮食。造模12周后，模型组随机选取3-6只大鼠处死，取胃黏膜做病检，证明符合胃癌前病变的病理诊断。造模成功后，进行干预治疗12周后，HE染色做病理组织切片，邻近的石蜡切片做免疫组化及Tunel染色，剩余组织进行Western-Blot、Q-PCR检测。对胃组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路及EMT相关Integrin、MMP2、E-cadherin因子分布进行定位，定性以及相对定量的表达。同时，利用16S rRNA测序分析对粪便样本进行16SrRNA基因测序分析｡研究证实复方蜥蜴散凝胶对PLGC大鼠肠道菌群具有不同程度的调节作用，增殖肠道有益菌Akkermansia、Lactobacillus、Bacteroides，抑制条件致病菌Prevotella、Coprococcus、Ruminococcus、Turicibacter。通过对模型大鼠胃黏膜组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路及EMT相关Integrin、MMP2、E-cadherin因子检测分析表明，复方蜥蜴散凝胶可通过调控 PI3K/Akt/mTOR 信号通路，抑制与EMT相关的Integrin、MMP2 因子表达，提高E-cadherin因子蛋白表达量，平衡癌变细胞的增殖凋亡失常、防治胃黏膜增生肠化。本研究证实菌群与PI3K/AKT/mTOR在胃癌前疾病发展过程中，菌群失调与炎症的发展存在交互作用，验证了PLGC-菌群-信号通路之间具有关联性。其机制可能是复方蜥蜴散凝胶通过对PLGC模型大鼠胃肠道菌群的调节作用，抑制与EMT相关的因子表达，从而起到抗癌、抑癌、阻癌的效果，治疗PLGC疾病。