基于微进化选择压力的骨髓增生异常综合征危险度转化与脏腑传变相关性研究

The study group believe that myelodysplastic syndrome (MDS) develops in line with micro-evolutionary theory, and its conversion in risk and TCM viscera transmission have a correlation in molecular genetics, both of which are the results of some kinds of "attack". Therefore, we will use the method of bone marrow cell culture and create selection pressure by simulating natural selection with ferritin, granulocyte colony stimulating factor and staphylococcus, all of which have practical significance in clinic. Then, we will dectect the index of bone marrow blast cell count,immunophenotype,DNA methylation of genes (DNMT3A,IDH1/IDH2,TET1/TET2/TET3), histone modification gene (the HAT and HDAC), ferritin gene (SF3B1) to observe the effects of the "attack" so as to analyze the molecular conection between the risk conversion and TCM viscera transmission in MDS. This study may explain the molecular genetic mechanism of cell microevolution in MDS partially.

课题组认为骨髓增生异常综合征（MDS）的病变过程符合细胞微进化理论。其西医危险度的转化和中医脏腑传变都是"打击"的结果，二者在分子遗传学层面具有相关性。据此，拟采用骨髓细胞培养的方法，选择具有临床实用意义的铁蛋白、粒细胞集落刺激因子、金黄色葡萄球菌模拟自然选择，制造选择压力，以骨髓原始细胞计数、免疫表型、DNA甲基化基因（DNMT3A,IDH1/IDH2,TET1/TET2/TET3)、组蛋白修饰基因（HAT,HDAC）、铁蛋白基因（SF3B1）为检测指标，观察所实施的"打击"措施对上述指标的影响，解析MDS危险度转化与中医脏腑传变之间的分子学基础，部分阐释MDS细胞微进化的分子遗传学机制。

目的：揭示骨髓增生异常综合征（MDS）危险度转化与中医脏腑传变的分子遗传学基础，明确二者之间的相关性；明确铁蛋白（SF）、粒系集落刺激因子（G-CSF）、金黄色葡萄球菌对MDS是否具有致变或致重作用，部分阐明MDS病变的细胞微进化机制。.方法：第一部分——骨髓液细胞体外培养前研究。（1）收集170例患者，其中脾胃亏虚毒蕴型MDS患者40例、脾肾亏虚毒蕴型MDS患者40例、肝肾亏虚毒蕴型MDS患者30例，急性髓系白血病（AML）患者30例，非血液肿瘤血液病患者30例。（2）检测骨髓液的原始细胞数、染色体、DNA甲基化基因（TET1/TET2/TET3基因、IDH1/IDH2基因、DNMT3A基因）、组蛋白修饰基因（HDAC1基因、HAT1基因）、铁蛋白基因（SF3B1基因）。第二部分——骨髓液细胞体外培养后研究。（1）骨髓液细胞体外培养，各组分别给予铁蛋白、G-CSF、金黄色葡萄球菌模拟自然选择，制造选择压力。（2）检测各培养组原始细胞数、染色体及上述基因。.结果：第一部分：脾胃亏虚毒蕴型MDS患者原始细胞大多＜5%，部分病例可见SF3B1基因表达量升高；脾肾亏虚毒蕴型原始细胞大多5%～10%，部分病例存在TET2基因过度表达；肝肾亏虚毒蕴型原始细胞大多＞10%，部分病例存在TET2基因过度表达。第二部分：（1）MDS脾胃亏虚毒蕴型：铁蛋白组SF3B1基因表达培养后较培养前升高，P＜0.05。（2）MDS脾肾亏虚毒蕴型：G-CSF组DNMT3A基因、TET2基因表达培养后较培养前升高，P＜0.05；金葡菌组HAT1基因、HDAC1基因表达培养后较培养前升高，P＜0.05。（3）MDS肝肾亏虚毒蕴型：铁蛋白组SF3B1基因表达培养后较培养前升高，P＜0.05；G-CSF组DNMT3A基因、TET2基因、SF3B1基因表达培养后较培养前升高，P＜0.05；金葡菌组HAT1基因、HDAC1基因表达培养后较培养前升高，P＜0.05。.结论：原始细胞计数、SF3B1、TET2、DNMT3A、HAT1、HDAC1基因可作为MDS危险度转化及中医脏腑传变的参考指标；MDS低中危向高危转化与其脏腑传变具有相关性。铁蛋白是MDS危险度转化的致重因素，G-CSF对中、高危型MDS存在促进疾病进展的风险，金葡菌有可能是MDS危险度转化的打击因素。据此，构建出MDS“同病类证”中医证候模型。