附子配伍减毒的体内作用过程及机制的代谢组学研究

附子是常用有毒中药，通过与甘草和干姜配伍达到增效减毒作用。以往研究多注重于配伍之后乌头类生物碱含量的变化，而对各成分在体内相互作用而导至的减毒效应研究较少。本课题拟通过采用整体动物和离体心肌细胞模型，对附子与甘草、干姜配伍前后以及其各自毒效成分配伍前后在动物体内和细胞内的动态变化过程进行监测，同时结合综合性的代谢组学技术手段对染毒后不同时段和状态下的体液、组织、细胞的代谢指纹谱分析，建立毒效相关的特征代谢谱模式，发现特征性代谢物。综合心功能检测指标，病理生理指标和细胞活性指标，代谢指纹谱的改变，以及与不同状态所对应的特征代谢物，探讨配伍减毒作用的体内生化过程和作用机理，进而对附子的配伍减毒增效作用进行阐释。本课题的结果能够对中药配伍减毒机制的研究提供新的科学数据和研究思路。

附子是常用有毒中药，通过与甘草和干姜配伍达到减毒增效作用。本课题采用大鼠和大鼠乳鼠心肌细胞模型，对附子与甘草、干姜或其代表性成分配伍前后在动物体内和细胞内的动态变化过程进行监测，同时结合综合性的代谢组学技术对染毒后的体液、组织、细胞的代谢指纹谱分析，建立毒效相关的特征代谢谱模式，发现特征性代谢物。在附子、甘草配伍对大鼠毒性影响的代谢组学研究中表明，在附子与甘草配伍后，大鼠机体的代谢环境较附子组大鼠更接近于正常对照大鼠。这主要体现在，甘草对由附子引起的大鼠尿液中TMAO、肌酸/肌酐，血浆中乳酸、肌酸、葡萄糖、脂类，粪样中琥珀酸、乙酸等代谢产物含量异常的调节上。相关受附子毒性影响显著的代谢途径在甘草的保护下使影响程度减小，附子与甘草配伍通过对机体内环境的调节对附子毒性具有缓解作用。在附子和甘草代表性成分新乌头碱和甘草次酸联合对大鼠毒性的研究中显示，甘草次酸对新乌头碱的毒性也具有缓解作用，主要体现在甘草次酸对尿液中亮氨酸/异亮氨酸、乳酸、2-酮戊二酸等代谢产物含量的调节上，多条受影响的氨基酸代谢途径得到保护，使新乌头碱的毒性降低。另外，建立了细胞代谢组学系统的研究方法，并进行了乌头类生物碱对大鼠心肌细胞毒性作用的代谢组学研究。在给予乌头类生物碱后，心肌细胞中乳酸、乙酸、谷氨酸、谷氨酰胺、牛磺酸、甘氨酸含量发生明显改变。而在6-姜酚与乌头碱对大鼠心肌细胞联合给药研究中发现，6-姜酚对细胞内牛磺酸、乳酸含量由新乌头碱引起的改变起到了明显的改善作用，对乌头碱的毒性具有缓解作用。另外，为了紧随国际代谢组学的研究步伐，进行了一些计划之外的研究，包括为了考察中药毒性对肠道菌群的影响建立了粪样代谢组学的研究方法，并进行了乌头碱对大鼠毒性作用粪样代谢组学的研究；为了优化检测方法，对在核磁共振检测中比较常见的尿样中代谢物化学位移易漂移的问题，进行了不同缓冲液对尿液中代谢物的化学位移的影响的考察。本项目基本按原计划完成，取得了丰富有价值的研究结果。