基于特异性靶向纳米技术的肾脏局部阻断CTGF对肾小球硬化的治疗研究

肾小球硬化（GS）是各种原因引起的慢性肾脏病最终共同的病理特征，是导致肾小球滤过率下降和肾功能衰竭的关键原因，其实质是肾小球固有细胞消失和细胞外基质成分的过度堆积。而系膜细胞在早期促进肾小球细胞外基质堆积中起着十分重要的作用。我们及其他作者近年来的研究证实，疾病状态下肾小球局部CTGF表达增加可以通过多个途径介导GS的形成。本研究拟探讨特异性阻断肾小球局部CTGF表达对GS形成的影响。我们在既往研究工作基础上，将纳米技术和siRNA技术进行整合，通过技术集成创新，首次构建基于系膜细胞CTGF表达靶向特异性纳米颗粒，利用anti-Thy1.1肾炎模型，探讨该纳米颗粒对系膜细胞CTGF过度表达的影响，以及对肾小球硬化潜在的治疗作用，为临床抗肾纤维化治疗提供新的思路和策略。

肾小球硬化（GS）是各种原因引起的慢性肾脏病最终共同的病理特征，是导致肾小球滤过率下降和肾功能衰竭的关键原因。我们通过与南京医科大学抗体中心合作成功获得重组OX-7单克隆抗体Fab段，并对单抗Fab段进行PEG修饰；完善了自组装纳米颗粒的操作流程；通过对颗粒的表征确定获得了接近电中性，大小约80nm的靶向颗粒。我们首先采用培养的大鼠系膜细胞作为试验对象，观察转染效率及对目的基因的沉默效应，发现特异性序列能有效降低80%的CTGF表达，并从6小时起进入细胞内部。接着我们通过选择荧光标记siRNA，制备纳米颗粒，观察尾静脉注射后靶向纳米颗粒在不同器官的蓄积情况，我们发现只有肾皮质有大量荧光信号富集，其余组织皆未见明显荧光信号，提示靶向颗粒的在体特异性。再次，我们通过选择针对CTGF基因序列的siRNA， 制备纳米颗粒，观察尾静脉注射后肾小球CTGF基因、蛋白表达水平时间改变的特征，提示2天治疗后就可以有效降低肾皮质CTGF表达，为后续试验治疗时间窗的选择奠定基础。我们通过选择针对CTGF序列的siRNA， 制备纳米颗粒，首先利用培养的肾小球模型，发现纳米颗粒能显著降低致纤维化分子PAI-1(49.2 %)，TGFβ1(23.6%)，FN(24.5%)mRNA表达，降低疾病组大鼠肾小球TGFβ1及FN的蛋白表达，分别为19.5%和33.3%,( p值均<0.05)。最后我们将靶向纳米颗粒注射入试验动物体内，发现靶向颗粒不影响疾病动物蛋白尿水平（p>0.05）;但能显著降低肾小球CTGF蛋白表达（>60%），及其他致纤维化因子如PAI-1，TGFβ1，FN mRNA表达，并减少小球FN堆积，最终改善肾小球系膜区胞外基质积聚。我们观察了肾外器官CTGF表达，未见明显脱靶效应。在顺利的完成既有研究计划的内容后，本研究组还进行了有益的拓展，探讨了CCN家族新成员CCN3与CTGF的相互作用在肾小球硬化形成中的作用及其初步的临床应用价值。我们在既往研究工作基础上，将纳米技术和siRNA技术进行整合，通过技术集成创新，首次构建基于系膜细胞CTGF表达靶向特异性纳米载体，利用anti-Thy1.1肾炎模型，探讨该纳米载体对系膜细胞CTGF过度表达的影响，以及对肾小球硬化潜在的治疗作用，为临床抗肾纤维化治疗提供新的思路和策略，同时还初步探讨了尿液检测CCN2，3在临床疾病诊断中的价值。