卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性与动脉粥样硬化危险关系研究

Epidemiological studies have demonstrated that low high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C) is an independent risk factor for atherosclerotic cardiovascular diseases(CVD). However, efforts to increase HD-C did not achieve consistent results. Low HDL-C is often accompanied by high serum triglycerides (TG) and accumulation of small lipoprotein particles. One of the important functions of HDL is its reverse cholesterol transport (RCT). Lecithin-cholesterol acylthansferase (LCAT) is the key enzyme in HDL metabolism and RCT. Although LCAT activity has long been regarded as a protective factor for atherosclerosis, there are few population based studies and the results are controversial. The main reason is that LCAT activities measured by the current methods did not reflect true activities in vivo, and the knowledge about LCAT activity and cofactors are limited. The purpose of this study is to set up a reliable method for measurement of LCAT activity. Based on this method, to investigate the possible inhibition factors under physiological states, demonstrate the protective effects of LCAT on atheroslerosis, and explore the new mechanism of "atheroslerotic lipoprotein profile" in the development of atheroslerosis. The newly developed LCAT activity method will provide a potentially useful tool for risk accessment of atherosclerosis.

大量流行病学研究证明，HDL胆固醇（HDL-C）降低是动脉粥样硬化性心血管病（CVD）的重要危险因素。HDL-C降低多伴有甘油三酯升高和小颗粒脂蛋白增多（血脂三联症），共同造成动脉粥样硬化危险。HDL的主要功能之一是促进胆固醇逆向转运（RCT），卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）是HDL代谢和RCT中的关键酶，LCAT活性一直被认为是重要的动脉粥样硬化保护因素。但多年来这种保护作用未能被证实，有关LCAT活性的人体研究甚少，且结果不一。主要原因是现有LCAT活性测定方法不成熟，对LCAT活性影响因素和生物学作用认识有限。本项目以建立可靠的LCAT活性测定方法为基础，研究生理状态下LCAT活性可能抑制因素及其作用程度，尝试证明LCAT活性的动脉粥样硬化保护作用，提出"血脂三联症"共存关系及其促动脉粥样硬化作用的新机制；同时为CVD防治提供有潜在应用价值的危险预示指标。

大量流行病学研究证明，高密度脂蛋白（HDL）胆固醇（HDL-C）降低是动脉粥样硬化性心血管病（CVD）的重要危险因素。HDL的主要功能之一是胆固醇逆向转运（RCT），卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）是HDL代谢和RCT中的关键酶, 长期以来一直预期LCAT活性是重要的动脉粥样硬化保护因素，但近年很多研究发现LCAT活性与动脉粥样硬化无关甚至是动脉粥样硬化的危险因素。原因主要是目前LCAT活性测定方法不够成熟，不同方法测定的LCAT活性可能具有不同的生物学意义。本研究选用具有共轭双键和紫外吸收的胆固醇类似物7-脱氢胆固醇（7-DHC）和1, 2-二癸酰基甘油-3-磷酸（10:0PC）（1:8, mol/mol）作为LCAT的反应底物，加入20mg/dL LCAT激活肽（LAP642），vortex 2min, 制备脂质体；在冰水浴中将脂质体与血清混合（50:1, v/v），37°C温育1h；加入正己烷提取脂质；HPLC分离7-DHC和7-DHC的癸酸酯，紫外检测，两组分归一化法定量，计算7-DHC分数酯化速率，LCAT活性。用所建方法测定120例健康志愿者血清的LCAT活性，分析其与CVD危险因素的关系。测定了500例行冠脉造影患者血清样本，分析LCAT与冠心病的关系。 结果显示，7-DHC, 10:0PC与LAP642组成的脂质体制备简单、脂质体澄清、光学显微镜和电镜下观察形态均匀，性质稳定。当温育时间0~8h、血清量0~20μL时，单位体积血清在每秒钟内酯化底物7-DHC的摩尔数为LCAT活性，以nKat/L的单位表示。测定结果与酶量线性相关，不受内源胆固醇和脂质的影响；方法平均批内和总CV分别小于2.5%。120例样本LCAT活性与身体质量指数、甘油三酯等正相关；与载脂蛋白AI，HDL-C等负相关。冠脉造影患者结果显示，LCAT活性升高与冠心病风险独立相关。结论：本研究在选择LCAT底物，研制脂质体，优化反应体系和反应条件，改进酶反应监测手段的基础上，建立了HPLC测定LCAT活性的方法，所建方法简便、精密，结果不受反应底物影响，为脂代谢机制研究和CVD危险分析提供了可靠的方法学基础。