Linc00238在HBV复制调控中的作用及机理研究

Hepatitis B virus infection is the main pathogen of acute and chronic hepatitis in China,the molecular mechanism by which chronic HBV infection causes liver damage and carcinogenesis remains elusive.In previous study, we found long non coding RNA,linc00238, was down regulated in both tissue samples and cell lines infected by HBV. Linc00238 was found interfere with HBV replication through in vitro study which suggested that linc00238 might be a new HBV inhibitor. Through bioinformation analyze, we found that miRNAs could interact with linc00238 directly. In this study,we would further explore linc00238-miRNA interaction and elucidate the probable pathogenic mechanism of lncRNA in HBV infection by biomolecular means which will be useful for the future development of anti-HBV therapeutics.

HBV感染所致慢性乙型肝炎是危害国人健康的重大疾病之一，目前对乙肝感染机体的致病机理尚不完全明确。课题组通过前期研究发现长链非编码RNA（linc00238）在HBV感染患者及细胞样本中表达明显下调。通过体外实验证实，linc00238对HBV复制具有抑制作用，提示linc00238可能是一种新的HBV抑制分子。利用生物信息学软件分析发现，部分miRNAs可与linc00238相互作用。本研究结合前期研究基础， 利用过表达、干扰等分子生物学手段筛选出作用于linc00238的miRNAs，进一步研究miRNA-linc00238相互作用与HBV感染关系。通过本研究加深对lncRNA、miRNA在HBV感染中的作用认识，为病毒-宿主相互作用提供新的视角。

越来越多研究发现非编码RNA(ncRNA)在疾病发生发展中具有明显作用。前期研究中，课题组发现非编码RNA Linc00238在HBV患者中表达的明显下调。本课题在前期研究工作基础上，进一步探讨非编码RNA在HBV感染中的作用。并取得如下发现：1、明确Linc00238在HBV感染中的作用。通过扩大样本量，进一步确定Linc00238在HBV患者中表达明显下调。在稳定表达细胞模型及瞬时转染细胞模型中进一步 印证Linc00238表达明显下调。利用过表达或敲减的方法，在细胞模型中观察Linc00238对HBV相互作用，发现过表达Linc00238可以下调HBV复制及蛋白表达。同时利用双荧光素酶报告系统证实，Linc00238对HBV启动子无影响，提示其可能作用于蛋白表达，或者通过间接作用进一步影响HBV感染宿主细胞。后续，我们将进一步研究Linc00238与HBV蛋白和cccDNA之间相互作用以及潜在的作用机制。2、明确miR-146a调控HBV复制的机制。利用生物信息学分析，我们对可能和Linc00238相互作用的miRNAs进行预测，并进一步发现miR-146a在HBV感染中表达上调，其表达趋势和HBV相反。进一步相互作分析却发现miR-146a与Linc00238无相互作用，而miR-146a通过下调硫酸类肝素3-0-磺基转移酶1（HS3ST3B1）促进HBV复制及蛋白表达。3、建立了新的细胞立体培养模型，并高效感染HBV病毒。目前，仍然缺乏有效的HBV感染模型，能够准确反映细胞表型，同时高效支持HBV感染。研究小组与英国伦敦大学学院肝病与消化健康中心合作，制备无细胞肝脏ECM生物支架，并将其用于HBV感染。结果表明，原代肝细胞及HepG2-NTCP细胞能够顺利在植入ECM生物支架，同时培养时间更长。qPCR进一步表明，细胞立体培养下，肝细胞特异性基因表达水平明显高于传统平面培养。同时立体培养下原代肝细胞和HepG2-NTCP细胞该模型较传统平面模型能够更好支持HBV复制及蛋白表达。该模型的建立，有助于进一步阐明HBV致病机理以及相关HBV药物研发。