有效成分群及有毒成分为目标导向的中药细辛有效安全可控的多层次评价体系的研究

The volatile oil of Xixin is effective and toxic. Previous study have shown Xixin decoction without volatile oil had strong anti-inflammatory and analgesic effects, but its active ingredient is still unknown; the toxicity of Xixin powder was extremely stronger than that of volatile oil,. which indicated the existence of non-volatile toxic substances. We have identified 62,non-volatile compounds, and 7 of them had anti-inflammatory activity. In this project, we will: 1. isolate 100 compounds from Xixin and study its ADME to identify 80 metabolites; 2 do pharmacological screening to find 10-20 non-volatile active ingredients; 3. isolate new toxic ingredients from Xixin guided by toxicity; 4. establish a qualitative and quantitative HPLC/MS method for determining active and toxic compounds of Xixin, develop an oil cell counting method to predict the content of volatile oil. Finally, we will establish a comprehensive quality evaluation system of Xixin to ensure its efficacy and safety.

细辛挥发油既有效又有毒。前期研究发现不含挥发油细辛煎液镇痛抗炎作用很强，但有效成分不明；细辛根粉末毒性远不能用挥发油毒性解释，推测存在挥发油以外剧毒物质。我们已从细辛分离非挥发性成分62个，发现7个成分有抗炎活性。本项目拟继续细辛化学系统研究，分离化合物100个；分析细辛鼻腔给药后进入血液、脑脊液的成分及灌胃后血液、脑脊液、尿液中的成分，并从尿液分离细辛代谢产物，拟鉴定入血成分及代谢物80个；对获得的细辛化合物进行动物及细胞水平镇痛、抗炎药效筛选，发现细辛非挥发性有效成分10-20个；动物毒性引导化学分离，新发现细辛有毒成分；以有效成分群及有毒成分为指标建立细辛HPLC/MS定性定量法以及油细胞计数预测药材挥发油含量方法等，测定大量细辛样品中成分含量，明确含量范围；对比鲜药材，确定保持干药材中成分含量稳定的药材加工贮藏方法。建成细辛有效安全可控评价体系，确保细辛用药有效安全。

本课题按时完成各项任务书要求，达到了预期的研究目标。.1. 探讨药效物质基础，发现15个新的有效成分和7个毒性成分. 对细辛乙醇提取物进行了系统分离，测定药材提取物的有效部位和单体化合物的抗炎活性，并对菲类含N化合物进行了体外肾毒性评价，另外也鉴定了不同方式给药后可进入正常动物及模型动物体内的来源于细辛的成分，基本上明确了细辛的药效物质基础，共确认细辛中15个新的有效成分（木脂素和萜类化合物）和毒性成分7个（菲类含N类化合物）。.2. 共建立7种以有效成分和有毒成分为目标导向的化学成分群的定性和定量研究方法. 以有效成分和有毒成分为目标导向，建立化学成分群的定性和定量方法，包括同时测定多个成分的HPLC方法和UPLC方法，针对非挥发性成分的LC-MS/MS和HPLC-DAD指纹图谱分析方法和针对挥发性成分的HS-GC-MS方法，以及分离细辛组织中单个油细胞的实验操作和HS-SPME-GC-MS分析方法。.3. 建立有效成分群和有毒成分为目标导向的中药细辛有效安全可控的多层次评价体系. 本研究使用7种定性定量分析方法，测定了不同品种、不同加工方法、不同部分细辛药材中活性成分的含量，分析方法和样品的多样化构成了多层次的评价体系。研究结果表明：a.北细辛和华细辛间存在较大的成分含量差异，而汉城细辛与北细辛没有明显差异；b.各样品间易挥发性成分差异较大，而直链酰胺类成分则没有明显差异；c.不同部分细辛药材存在较大的差异；d.细辛药材加工总体目标应该是在保证快速干燥的前提下，尽量维持在较低的温度。. 本研究共发表SCI期刊论文5篇，核心期刊论文4篇，授权专利1项。基于本项目及其它课题组前期的科研积累，我们提出“中药显效形式、叠加作用和毒性分散效应”这一新的理论假说，并参加多次学术会议，得到学科领域的一致好评，该理论可以指导中药药效物质及作用机制的研究、新药研发和对现有药材质量控制体系的进一步完善。. 培养研究生3人。经费支出101.78万元，各项支出与预算基本相符，剩余经费16.22万元，计划用于本项目后续研究。