动物鼓膜干细胞分布规律及慢性鼓膜穿孔的修复技术研究

Chronic otitis media is one of the most common diseases in the otolaryngological department, and tympanic membrane (TM) perforation is a common complication. Most chronic TM perforations require surgical interventions such as tympanoplasty. However, the surgical procedures have disadvantages, for instance, high cost, anesthesia-associated risks. There are no effective methods in outpatient department for treating chronic TM perforations yet. In the present study, chronic TM perforation models will be established, to investigate stem cell distribution in TM, through analyzing epithelial stem cell proliferation and differentiation, to promote the chronic TM perforation repair by using growth factor. In the present study, the technology for chronic TM perforation repair in outpatient department will be an alternative to traditional surgery; will be significant in improving treatment of chronic TM perforation in our country.

慢性中耳炎是在耳鼻咽喉科领域中较常见的疾病，鼓膜穿孔是其常见的并发症，慢性鼓膜穿孔需要手术（鼓膜修补术）治疗，但手术费用昂贵，具有风险，故需要在门诊治疗的慢性鼓膜穿孔修补的方法，然而至今还没有。本项目研究要点包括构建动物的慢性鼓膜穿孔模型，探讨干细胞在鼓膜上的分布特征，通过实验分析鼓膜上皮干细胞增殖与分化规律，利用生长因子促进鼓膜穿孔的修补，本研究的门诊治疗的技术，替代传统的鼓膜修补手术，在提高我国慢性鼓膜穿孔修复的治疗水平具有重要意义。

课题以动物的慢性鼓膜穿孔、干细胞、鼓膜再生为研究对象，建立大鼠的鼓膜穿孔模型，采用鼓膜上皮干细胞表达、组织工程等技术刺激鼓膜上的干细胞靶向点，研究干预鼓膜穿孔修复。实验结果：（1）开发了大鼠的慢性鼓膜穿孔模型，机械破坏鼓膜组织后，大部分自行愈合，但热烧伤导致的鼓膜穿孔常引起广泛的血管损伤、血供障碍及鼓膜坏死,烧灼是不利于鼓膜穿孔愈合的因素，有效地延迟大鼠鼓膜穿孔的愈合。在机械性穿孔鼓膜以后，用丝裂霉素、地塞米松等药物干预鼓膜上皮细胞，抑制有丝分裂及蛋白质的合成，而抑制细胞的生长繁殖，抑制鼓膜穿孔周围的再生能力，持续地鼓膜穿孔。（2）正常鼓膜组织，免疫组化染色后，评估INGβ1和CK19的表达，干细胞标识物的阳性表现是在整个鼓膜上都显示，但是鼓膜的锤骨柄和鼓环部位更突出地表达， CK19比INGβ1表达更明显。急性鼓膜穿孔以后愈合过程当中，INGβ1和CK19两个都比正常鼓膜显著地表达，在锤骨柄周围和鼓环处表达显著。慢性穿孔鼓膜上INGβ1和CK19的表达在锤骨柄周围和穿孔边缘的鼓环部位，这里的表达比正常鼓膜更明显，除此之外这些标识物阳性表达在鼓膜紧张部以及无穿孔的鼓环部。还有INGβ1和CK19染色强度是在1周，3周，6周及9周与比较正常鼓膜更明显。（3）补片支架对鼓膜细胞生长和迁移的作用，证实了壳聚糖对鼓膜细胞的作用。联合使用壳聚糖和EGF可能对慢性鼓膜穿孔有协同作用。制备了IGFBP-CPSs,并证明它成功地释放IGFBP2,IGFBP-CPSs有效地诱导了鼓膜细胞的迁移，评估IGFBP-CPSs对鼓膜穿孔的愈合能力，慢性鼓膜穿孔体内实验证实干细胞刺激技术成功再生鼓膜。此研究为进一步的阐明可作为慢性鼓膜穿孔的外科治疗的替代方法，并可能代表一种选择性治疗鼓膜穿孔提供理论依据。