厚朴叶中以核受体RXRα为靶点的化学成分分离及抗癌作用机制研究

我们的前期研究表明厚朴叶提取物能显著地抑制肿瘤细胞生长，且其含有的主要化学成分honokiol对细胞中核受体RXRα具有很好的调节作用。本研究以福建省西北部地区资源丰富的道地药材厚朴的叶子为原料，在受体结合分析及双荧光素酶报告基因分析等核受体RXRα靶点筛选模型跟踪下，以高效液相制备色谱等植物化学分离手段筛选制备厚朴叶中以核受体RXRα为作用靶点的活性化学成分。并通过蛋白质印迹、免疫荧光显微分析等化学生物学技术方法检测和探索这些化学成分与核受体RXRα及其调控的癌细胞凋亡通道的作用关系。这个研究将有助于进一步开发厚朴叶中具有抗癌潜力的化学成分，也可能有助于发现新的抗癌作用通道。

近年来厚朴的抗癌潜力引起科学家们广泛的兴趣，我们在前期研究的基础上，基于核受体靶点从厚朴叶中筛选抗癌成分，现已从凹叶厚朴叶中分得十五个化合物，其中的十二个已鉴定为：magnolol (1)、honokiol (2)、obovatol (3)、kaempferol（4）、kaempherol 3-O-alpha-rhamnoside（5）、quercitrin （6）、rutin (7)、17-tritriacontanone (8)、glycerol trioleate（9）、spinacene（10）、β-carotene（11）和lutein（12），化合物4-5、8-12为首次从凹叶厚朴叶分得。通过活性分析，进一步确定主要抗癌活性成分为新木脂素类化合物1-3，以2(HNK)效果最佳。课题紧接着重点针对HNK开展抗乳腺癌作用效果评价及探索分子作用机制。HNK在MCF-7乳腺癌细胞及移植瘤裸鼠实验中均显示较好的抗癌潜力，意外的是，外源转染高表达RXRα或者siRNA干扰RXRα表达均不能明显地影响HNK对MCF-7细胞产生的凋亡作用，表明HNK并非直接靶向核受体RXRα引起癌细胞凋亡，但我们在实验中发现TNFα能短时间内显著地诱导MCF-7细胞中孤儿核受体TR3的表达，而HNK能明显地抑制其表达，并极大地促进了TNFα引起的MCF-7细胞凋亡。进一步的实验结果表明TR3在乳腺癌细胞核内起着促进癌细胞生存的功能，而HNK通过抑制NF-κB通路激活阻止TR3表达从而诱使癌细胞凋亡。临床研究发现在乳腺癌中常常过表达TNFα、NF-κB及Nur77，TNFα具有促使MCF-7细胞凋亡的作用，但这种作用可能被癌细胞的保护因子TR3所削弱，我们的研究结果最终阐明HNK抗MCF-7乳腺癌作用的机理是HNK通过抑制NF-κB炎症信号通路抑制TR3表达，排除凋亡障碍从而诱导癌细胞凋亡。在高表达TNFα的肿瘤微环境中，用小分子物质激活并增强TNFα诱导癌细胞凋亡的作用方式可能会是一种有效而且副作用小的方法。本研究的科学意义是从分子水平上阐明了厚朴的主要成分抗乳腺癌的作用和独特的作用机理，为开发其作为抗癌新药打下基础，同时有益于炎癌关系研究及利用这种抗肿瘤作用机理寻找新的高效低毒的抗癌药物。