云南龙血竭及龙血素A 、B单体对肝星状细胞促血管新生和肝纤维化间质重建的影响

肝硬化是危害人类健康的常见疾病，星状细胞(HSC)活化和血管新生是进展性肝纤维化间质重建的特征，活化HSC收缩、新生血管分流导致肝损伤持续发展。前期发现，活化HSC中与血管新生有关的整合素高表达，活化HSC能诱导骨髓间充质干细胞(MSC)向内皮细胞(EC)分化，慢性肝损伤中血管新生的程度与肝纤维化进展相关。云南龙血竭有活血化淤和止血散淤的作用，龙血素A 、B单体为其主要活性成分，龙血素B能减轻硫代乙酰胺（TAA）诱发的肝纤维化。分离大鼠HSC和MSC，建立活化HSC参与的体外血管形成模型，分别用TAA和胆总管结扎（BDL）诱导大鼠肝纤维化，比较龙血竭、龙血素A 、B单体对活化HSC生物行为、促血管新生因子表达和体外血管形成的干预作用，研究它们对慢性肝损伤中血管新生、肝纤维化进程的影响，探讨龙血竭抗肝纤维化的活性成分及可能的细胞分子机制，为天然药物龙血竭抗肝纤维的有效性和安全性提供实验依据。

云南龙血竭有活血和止血的功效，对多种组织损伤有较好的促修复作用，但其在慢性肝损伤中的防治作用及潜在的机制未见报道。我们通过建立大鼠慢性肝损伤和体外肝星状细胞活化模型，在龙血竭干预的体内外实验中，运用组织和细胞免疫组化，RT-PCR，Western blot等方法，证实:1.龙血竭能够降低肝纤维化大鼠血清中透明质酸酶、层粘连蛋白和IV型胶原及谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平,并能改善纤维化大鼠程肝脏的病理损伤程度,减轻肝纤维化大鼠肝组织中胶原纤维的增生。2.龙血竭中的有效成分单体龙血素B下调慢性肝损伤大鼠中TNF表达水平，同时上调PPAR-α 表达，提示龙血素B抗肝纤维化机制与抗氧化应激损伤有关。3.龙血素B通过干扰促纤维化的TGF -β1/smad信号通路，并阻断其信号的下传达到抗纤维化的作用。4龙血素B下调活化HSC细胞中促血管新生因子VEGF和HIF-1、NRP-1mRNA等的表达,提示龙血素的抗纤维化作用也与抗血管新生有关。综上，项目研究证实龙血竭中的活性单体龙血素B通过抗氧化应激和抑制病理性血管新生作用，干预大鼠慢性肝损伤中纤维发生和血管新生的间质重建过程，而发挥抗肝纤维化作用。研究阐明了龙血竭抗肝纤维化的活性成分及其细胞分子机制，为天然药物龙血竭抗肝纤维的有效性和安全性提供实验依据。以上研究目前已正式发表相关论文6篇(标注资助)，目前1篇SCI论文（标注资助）正在评审中，通过该课题研究已培养硕士3人，博士1人，正培养博士后和中青年学术带头人各1人，课题组成员参加国内外学术会议8人次，目前研究成果正在积极申报1项中药专利。