依据制药论的黄柏一药二制物质基础与药效学变化机理研究

The processing method for Cortex Phellodendri include processed with yellow wine and salt-water. Previous research has shown that their chemical material base and pharmacological was different. So we put forward that one drug processed with two methods, the effect can be clear heat and mourish yin individually, that is the effect trend can be upward and downward. The research route of this project is processing-substance-pharmacodynamic-pharmacokinetic combined with metabonomics. We expect to find out the general changes of isoquinoline and limonin after processing, detect the content of primary chemical constituents after processing with two methods, then explain the processing mechanism.Develop pharmacodynamic experiments using biology characteristics, material metabolism and energy metabolism as index. Through observing insulin regulation and control, P450 enzyme activity and COX-2 expression, we can declare that which processing methods of Cortex Phellodendri can improve the effect of efficacy of dissipating heat and nourishing yin. Through building Caco-2 cell model and HMBCEs transmission experiments, we can find out the acting effect drift of Cortex Phellodendri processed with different methods. Moreover, we can determine the tissue distribution of index ingredient, which will guide different treatment using different peocessed products in clinic. Based on above experimetns, we can explain processing mechanism of Cortex Phellodendri processed with yellow wine and salt-water.

研究相反为制、相资为制的酒黄柏和盐黄柏的物质基础与药理药效变化，提出"一药二制，可清可补、可升可降"的假说。针对黄柏炮制的以热制寒、寒者益寒及引药上行清热燥湿、下行滋阴泻火的作用，采用"炮制-物质-理效-药动"的研究模式，结合代谢组学的方法进行研究。用色谱方法，对黄柏炮制品和模拟炮制品中原小檗碱类生物碱和柠檬苦素类成分的共性变化进行研究，同时分析黄柏初生物质炮制前后的含量变化，从物质基础方面说明黄柏炮制机理。以宏观体征、物质代谢、能量代谢等为指标进行药效学实验，在细胞分子药理层面，对胰岛素调控、P450代谢酶活性、COX-2的表达进行考察，说明黄柏清热降火作用的机理；通过药动学实验，Caco-2细胞模型和脑微血管内皮细胞通过率等实验，加以代谢组学的方法，说明黄柏作用趋向的变化。从而证明假说，解释黄柏从制与反制，可清可补，可升可降的原理。

炮制原理研究以及炮制所致药性变化研究，一直是中药炮制学科的科研难点和重点。本项目旨在通过现代的科学手段验证和揭示黄柏的传统炮制理论，我们的假说为黄柏“一药二制，可清可补，可升可降”。经研究证明：黄柏盐炙寒性增强，沉降性增强，下行入肾；酒炙后寒性减弱，升浮性增强，上行入脑，清上焦热，而假说中的“清”指的是“清热”，“补”就是“滋阴”，项目组先后通过炮制化学，药效学，药动学和代谢组学等实验得到了证明。.在黄柏炮制前后的化学成分研究中，对初生物质和次生物质的变化分别进行了考察，其中在初生物质的研究中（包括多糖，蛋白质，氨基酸等）发现与前期我们所参考的973课题研究成果基本一致，而在次生物质（黄柏中的生物碱和柠檬苦素类成分）的炮制变化的考察中发现黄柏中原小檗碱类生物碱类成分可生成新的一系列化合物，分别为小檗红碱，巴马红汀，药根红碱，其反应历程为原化合物9位甲基脱掉而连上羟基，该系列化合物较原有化合物具有极性增强，水煎出效率增加；一定方面上抗炎和抗癌的活性增强；体内吸收较小檗碱稍好的特点，这样的炮制化学转化为增效提供了依据。.在黄柏炮制前后清热和滋阴的功效变化研究中，验证了黄柏炮制前后的寒热药性变化规律，课题中对生黄柏、酒黄柏、盐黄柏三者进行了药效学对比，以宏观体征、能量代谢、物质代谢等各种指标的药效学实验，兼以胰岛素调控、药物代谢酶P450活性，验证了盐黄柏清热效果的增强。另从不同黄柏炮制品肾阴虚大鼠滋阴功效的影响研究中，发现滋阴方面盐黄柏要优于酒黄柏。.在药动学的考察中，血药浓度实验发现黄柏经过辅料炮制后，能促进黄柏中的有效成分小檗碱，黄柏碱的吸收，延长消除时间。此外在Caco-2实验中，发现黄柏炮制后新成分更容易被体内吸收，生物利用度有所提高。另通过药物的组织分布实验发现了药物有效成分在上焦和下焦的脏器相对占比变化趋势符合上行和下行规律，并以HBMEC和HA1800细胞体外共培养模式所建立的血脑屏障实验中，发现酒黄柏的炮制品中指标性成分血脑屏障透过率稍高，进而说明了黄柏酒炙可以引药上行的作用。.在代谢组学实验中，发现黄柏不同炮制品对机体调节体温的作用与相应的生物标记物中胆碱类和氨基酸类有关，而盐黄柏相对于生黄柏其作用靶标和通路更多，进而体现了盐黄柏清热作用的增强。.以上通过相应实验手段，以现象和机制验证和解释了黄柏炮制过程中寒热及升降浮沉的复杂药性变化。