功能未知的lncRNA：RP11-867G23.12调控三阴乳腺癌侵袭转移的作用机制研究

RP11-867G23.12 is an unknown lncRNA, which was selected via high-through lncRNA microarray, and down-regulated in triple negative breast cancer significantly. In the previous study, we found that over-expression of RP11-867G23.12 could inhibit the invasion of triple negative breast cancer cells; BRMS1 was supposed to be a potential target of RP11-867G23.12 via bioinformatics analysis and experimental results; and BRMS1 was reported to function in the TNBC invasive process. Above all, we hypothezed that RP11-867G23.12 might regulated TNBC invasive ability via BRMS1. For further study, we intend to clarify the biological features of RP11-867G23.12; confirm the function of RP11-867G23.12 in TNBC invasive process by using overexpression and silencing strategies; by using BRMS1 as the clue, to explore the molecular mechanism of how RP11-867G23.12 regulates TNBC invasion. Up to now, these is no report about the effect of RP11-867G23.12 on TNBC migration, this study may afford new therapeutic target to protect patients from TNBC.

RP11-867G23.12是一条我们通过lncRNA芯片筛选获得的、显著低表达于三阴乳腺癌（TNBC）中、功能未知的lncRNA。前期发现，RP11-867G23.12过表达可显著降低TNBC细胞的侵袭能力；生物信息学和实验结果均提示BRMS1可能是RP11-867G23.12的靶基因；而文献和实验表明BRMS1与TNBC的侵袭转移密切相关。因此，RP11-867G23.12可能通过BRMS1影响TNBC的侵袭转移能力。本研究拟：阐明RP11-867G23.12的生物学特征；采用过表达和沉默策略，明确RP11-867G23.12对TNBC侵袭转移能力的影响；以BRMS1为机制主线，揭示RP11-867G23.12调控TNBC侵袭转移的分子机制。RP11-867G23.12在TNBC侵袭转移过程中的作用和机制未见报道，因此具有源头创新型，可能为TNBC的防治提供新的靶标。

三阴乳腺癌因不表达ER、PR和Her2受体，缺少相应的治疗靶点，对内分泌、靶向治疗不敏感，是预后较差的一种亚型。该亚型恶性程度高，易侵袭转移、复发，是研究的难点和热点之一。近些年，长链非编码RNA在肿瘤细胞恶性生物学行为中的作用逐渐被揭示，受到关注。我们筛选了TNBC中差异表达的lncRNA，并对RP11-867G23.12展开了功能研究。利用定量PCR在53对乳腺癌和癌旁组织中验证了RP11-867G23.12的表达水平，发现其在癌组织中低表达。其在三阴细胞株MDA-MB-231和HCC1937中的表达显著低于非三阴细胞株MCF-7和T47D。通过构建RP11-867G23.12过表达质粒转染HCC1937和MDA-MB-231：CCK8检测发现RP11-867G23.12对细胞增殖活力无显著影响；流式检测发现RP11-867G23.12对细胞凋亡无显著影响；划痕和tranwell分别检测发现RP11-867G23.12可以抑制MDA-MB-231和HCC1937的迁移；transwell(铺胶)检测发现RP11-867G23.12可以显著抑制MDA-MB-231和HCC1937的侵袭能力。定量PCR检测BRMS1在乳腺癌组织内的表达水平显著高于癌旁，与RP11-867G23.12的表达相反。RP11-867G23.12在核和胞浆内均有分布，以核内居多。我们进一步对乳腺癌进展过程中阶段特异表达的差异lncRNA展开了相关研究。我们通过对TCGA数据库700例样本的研究分析发现早、中和晚期差异表达的lncRNA分别为193、208和207条。进一步通过表达变化趋势分析、数据库预测靶向关系以及表达相关性分析，最终以122条lncRNA、67条miRNA和119条mRNA构建了乳腺癌进展过程相关的lncRNA-miRNA-mRNA调控网络。miR-20b/93/106a/106b家族位于调控网络的中心，可能对乳腺癌的发生发展和进展具有重要的调控作用。预后分析，MESTIT1、LOC100128164、LINC00667、DNMBP-AS1、ATP1A2和NR4A3均与乳腺癌患者的总生存期正相关。以上结果表明，RP11-867G23.12低表达与TNBC恶性生物学行为密切相关，BRMS1可能参与了调控过程，可为临床应用lncRNA 防治乳腺癌提供一定的理论依据。