致心律失常型右室心肌病发病的分子机制研究

致心律失常型右室心肌病(ARVC)以右室心肌萎缩及纤维脂肪替代为病理特点，表现为右室功能障碍和室性心律失常，甚至猝死，属常染色体显性遗传病。尽管已发现了一些突变基因可能是ARVC的候选致病基因，但还有半数ARVC患者不存在上述基因突变。因此，不能排除存在尚未被发现的ARVC致病基因。近两年，应用外显子组测序方法寻找疾病的致病基因有一些非常成功的先例。它的特点是覆盖度更深、数据更准确，更简便、经济和高效。我们在前期工作中应用外显子组测序的方法，在2例ARVC患者中获得了一些新的基因突变。在此基础上，本课题将在扩大样本量的6例ARVC患者进行外显子组测序，以验证前期工作，并进一步在13例患者对获得的突变基因进行精确测序，以发现新的ARVC候选致病基因，并对其进行基因表达和功能研究，最终获得新的ARVC致病基因。本课题的完成将有利于在分子水平阐明ARVC的发病机制及对ARVC进行诊断和鉴别诊断。

致心律失常型右室心肌病(AC)以右室心肌萎缩及纤维脂肪替代为病理特点，表现为右室功能障碍和室性心律失常，甚至猝死，属常染色体显性遗传病。尽管已发现了一些突变基因可能是AC 的候选致病基因，但还有半数AC患者不存在上述基因突变。因此，不能排除存在尚未被发现的AC致病基因。近年来，应用外显子组测序方法寻找疾病的致病基因有一些非常成功的先例。它的特点是覆盖度更深、数据更准确，更简便、经济和高效。本课题对6例AC患者进行了外显子组测序，并进一步在13例患者对获得的突变基因进行了精确测序。本研究在AC患者中发现了桥粒蛋白基因DSG2和PKP2突变（DSG2 p.L797Q； PKP2 p.S249T, p.E808fsX30）。进一步的功能学研究显示，DSG2 p.L797Q突变并未影响蛋白定位及表达，但通过功能预测，该变异可能属于疾病易感基因，通过增加患者疾病易感性而参与AC发病过程。在携带PKP2 p.S249T, p.E808fsX30变异的病变心肌组织中， PKP2蛋白表达量降低，与此同时，闰盘蛋白JUP和Cx43的表达也显著降低。因此，我们推断PKP2基因的这二种突变可能是通过影响闰盘蛋白表达参与AC的发病过程。此外，我们在细胞学水平探讨了与PKP2调控相关的RhoA激酶在AC发生过程中的作用。结果显示，AC患者心肌组织中RhoA活性与PKP2表达调控并不是简单的线性关系，而是该激酶在病变心肌组织中活性增加，在其活性增加的心肌组织中，缝隙连接蛋白Cx43的表达也增加，细胞学实验结果也证实，心肌细胞中RhoA活性升高后，Cx43表达上调。因此，我们推论，RhoA可能参与了AC发病过程，并通过影响缝隙连接蛋白Cx43表达发挥作用。本课题的完成将有利于在分子水平阐明AC发病的分子机制。