CKLF-1-C19对银屑病皮损趋化因子功能的干预调节机制研究

Psoriasis is a chronic inflammatory disease induced by Th1 cells. Chemokines presented by dermal microvascular endothelial cells play an crucial role in recruiting T cells to the skin. Based on the research of expression, function and mechanism of a novel chemokine CKLF-1 in psoriasis, we intend to further study the regulation mechanism of its C terminal derived peptide C19 as antagonist to CKLF-1 and other chemokines in psoriasis and interaction with receptors. First, testing the expression of CKLF-1, CCL17, CCL22 and CX3CL1 in endothelial cell of psoriasis lesion and the expression of receptors CCR4 and CX3CR1 in psoriasis lesion and peripheral blood lymphocyte. Then we observe the CKLF-1-C19 effect on the chemotactic activity of CKLF-1 attracting Th1 cells and the regulation influence on the proliferation of microvascular endothelial cells and keratinocytes. Establishing psoriasis experimental animal model (human psoriasis lesion-SCID mice transplanted model) and CKLF-1 encoding gene transfer mice, we applied CKLF-1-C19 peptide or CCR4 monoclonal antibody to them, observing the improvement of psoriasis lesion. For research new anti-inflammatory drug aiming at chemokine, providing scientific basis and idea.

银屑病是Th1细胞介导的慢性炎症性疾病，在Th1细胞归巢至皮肤过程中真皮微血管内皮细胞表达的趋化因子起十分重要的作用。本项目在完成了系列探讨CKLF-1在银屑病中的表达、功能和机制研究基础上，进一步研究CKLF-1分子C端衍生肽C19作为拮抗剂对银屑病皮损CKLF-1等趋化因子功能及其与受体相互作用的干预调节机制。首先检测CCL17、CCL22及CX3CL1在银屑病皮损内皮细胞的表达，观察其受体CCR4及CX3CR1在皮损及外周血淋巴细胞的表达；通过体外细胞培养，观察CKLF-1-C19对CKLF-1诱导的Th1细胞的趋化活性及对真皮微血管内皮细胞和角质形成细胞增殖的调节，可能的信号传导通路；构建CKLF-1转基因小鼠，建立银屑病实验动物模型（人银屑病皮损-SCID鼠移植模型），经CKLF-1-C19多肽和抗CCR4单抗处理后观察银屑病皮损改善情况。为研发自主知识产权治疗药物提供科学依据。

背景：银屑病是Th1 细胞介导的慢性炎症性疾病，在Th1细胞归巢至皮肤过程中真皮微血管内皮细胞表达的趋化因子起着十分重要的作用。趋化因子样因子1（CKLF1），一种人类细胞因子，是CCR4的功能性配体，表现出广谱的白细胞趋化活性，并在银屑病发展中起重要作用。本项目在完成了系列探讨CKLF1在银屑病中的表达、功能和机制研究基础上，进一步研究CKLF1分子C端衍生肽C19作为拮抗剂对银屑病皮损CKLF1等趋化因子功能及其与受体相互作用的干预调节机制。内容：首先检测CCL17、CCL22在银屑病皮损内皮细胞的表达，观察其受体CCR4在皮损及外周血淋巴细胞的表达；通过体外细胞培养，观察CKLF1-C19对CKLF1诱导的T细胞的趋化活性及对真皮微血管内皮细胞和角质形成细胞增殖的调节，及可能的信号传导通路；建立银屑病实验动物模型，经CKLF1-C19多肽处理后观察银屑病皮损改善情况。结果：银屑病皮损中CCL17、CCL22弥漫性表达于整个表皮和真皮微血管内皮细胞；体外实验证明TNF-α通过ERK，JNK途径促进HUVECs表达趋化因子CCL17和CCL22，CKLF1-C19作为拮抗剂通过ERK1/2和p38-MAPK信号通路抑制CKLF1诱导的HUVECs的增殖；在动物模型中，注射C19后可以抑制银屑病样皮损中磷酸化的p38、ERK和JNK的表达，所以C19可以影响MAPK信号通路以改善银屑病皮损的炎症反应。意义：C19可能通过抑制MAPK信号通路，从而减少T细胞和中性粒细胞的趋化，抑制内皮细胞的增殖，改善咪喹莫特小鼠的银屑病样皮炎的表现，表明C19在银屑病中的保护作用。C19是治疗银屑病的多肽药物的理想候选者。