let-7a抑制尤文肉瘤恶性表型的分子机制研究

尤文肉瘤(ES)是一种高度恶性骨肿瘤,异常活跃的IGF1/IGF1R信号是ES细胞抗凋亡与增殖的关键.miRNA参与肿瘤的发生、发展.是否有miRNA参与调控IGF1/IGF1R信号途径引起了我们的关注.我们前期对ES组织进行了miRNA芯片分析,发现let-7a的表达明显下调，并通过Northern得到证实;运用miRNAs靶基因预测软件分析let-7a发现:IGF1R极有可能是let-7a负调控的靶基因.我们进一步鉴定了IGF1R为let-7a的靶基因，结果支持了我们的推测.因此,本研究将在上述前期工作的基础上,探讨let-7a负调控靶基因IGF1R抑制ES细胞恶性表型的分子机制,并通过裸鼠成瘤实验进行验证.课题将为深入研究let-7a调控ES的发生、发展及转归奠定基础;为ES提供一条潜在的治疗途径;为新型药物的研制奠定基础;同时,将进一步阐释miRNA调控肿瘤的机制.

（一） 中文摘要：.多项研究表明miRNA在肿瘤发生发展的多项生物学过程中扮演着重要的角色。本研究中我们首先在 8 对尤文肉瘤(ES)组织和瘤旁正常组织中检测 let-7a 的表达，结果显示 let-7a 在ES组织中呈表达下调的趋势，我们接着检测了ES细胞A673、SK-ES-1、RD-ES细胞以及MSC细胞let-7a的表达水平，发现ES细胞中let-7a的miRNA表达水平低于MSC细胞。然后我们鉴定了CDK6是let-7a的直接靶基因，同时我们在尤文肉瘤细胞系A673、SK-ES-1 中过表达let-7a和敲低CDK6(si-CDK6)，观察其对细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭的影响，结果显示 let-7a以及si-CDK6可明显的抑制细胞增殖、迁移及侵袭，同时早期凋亡的细胞明显增多。let-7a通过直接靶向 CDK6在ES发展中发挥作用。最后，我们利用裸鼠进行荷瘤实验，多点注射 let-7a mimics 观察其对瘤块生长的影响，进一步证明了过表达let-7a可明显地抑制肿瘤的生长。我们研究证实let-7a能够明显抑制尤文肉瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤细胞的周期进程，上述作用可通过抑制CDK6的表达实现的。我们的实验为 let-7a用于尤文肉瘤的诊断和治疗奠定了生物学基础。