miR-125b通过靶向下调EZH2促进HBV复制的机理研究

Nowdays, how to control hepatitis B virus transcription template cccDNA is the basic way to cure chronic HBV infection. Our preliminary results found miR-125b inhibited intranuclear EZH2 expression, which is a transmethylase, and knockdown of EZH2 enhanced HBV replication, since EZH2 catalyzes three methylations for lysine 27 in histone 3 and then suppresses histone activity, thus we hypothesize that miR-125b may downregulate EZH2 to interfere in methylations of histone 3, which bounded to HBV cccDNA and finally affects the transcription activity of cccDNA. Our project will use cell transfection, ChIP, immunoblotting to explore if miR-125b could upregulate cccDNA transcription activity via EZH2, further will conbine HBV infection in vitro and vast clinical samples to analyze if the cccDNA transcription activity could be intervened by methylations of histone 3, we will clarify the mechanisms of HBV transcription and replication regulated by miR-125b through epigenetics, and provide data for exploiting drugs to control HBV cccDNA and cure chronic HBV infection.

如何有效控制患者体内乙肝病毒转录模板（HBV cccDNA）是当前治疗慢乙肝感染的根本途径。我们前期发现小分子miR-125b会抑制肝癌细胞核内甲基转移酶EZH2表达，同时敲除EZH2促进HBV复制，而EZH2可以通过催化组蛋白3第27位赖氨酸发生三甲基化进而抑制组蛋白转录激活功能，由此我们推测，miR-125b可能通过抑制EZH2来干扰与HBV cccDNA结合的组蛋白3发生甲基化，进而上调HBV cccDNA的转录活性。本课题将首先通过细胞转染、ChIP、免疫印迹等方法探索miR-125b是否会通过EZH2上调cccDNA转录活性，进一步通过HBV体外感染模型和临床肝组织样本分析组蛋白3甲基化与HBV cccDNA转录活性间的关系，旨在从表观遗传学角度阐明miR-125b促进HBV复制的机制问题，为现阶段以cccDNA为靶标的慢乙肝感染药物开发提供实验基础和临床数据支撑。

慢乙肝感染导致的肝纤维化、肝癌等肝疾病是全球范围内的一个公共健康问题，如何有效控制患者体内病毒复制是当前治疗慢乙肝感染的根本途径。本项目在前期“miR-125b通过调控代谢相关通路LIN28B/let-7促进HBV复制”的研究基础上进一步通过体外细胞、体内小鼠和临床样本三个层面的研究探讨HBV与宿主肝细胞间的互作作用。研究结果发现肝细胞内高表达的miR-125b可以通过促进cccDNA的转录增强HBV的复制能力，同时会干扰肝细胞核内甲基转移酶EZH2及下游分子H3K27M3表达，后两者又参与调控肝细胞的生长代谢。从机制上看，HBV感染可以上调宿主肝细胞表达和分泌酶促因子ENPP2进而促进肝细胞生长，且ENPP2与EZH2表达正相关，后者通过miR-200c/BMI1途径调控肝细胞生长。由此表明宿主肝细胞通过miR-125b、EZH2/H3K27M3等分子途径调控病毒复制，而病毒感染又会通过ENPP2等分子反馈调控宿主肝细胞的生长代谢，病毒与宿主间相互制约相互影响。以上成果有助于我们更好的理解HBV感染的致病机理，为针对乙肝相关肝癌分子靶向药物的开发提供实验依据。