枇杷叶紫珠抗老年痴呆活性成分及其作用机制研究

采用现代色谱、波谱技术分离鉴定枇杷叶紫珠苯乙醇苷类成分；采用体外细胞培养系统包括人神经母细胞株SH-SY5Y和大鼠嗜铬细胞瘤细胞株PC12等，对分离的苯乙醇苷类成分进行活性筛选；根据筛选结果，进行构效关系分析，阐明其活性基团和活性中心；选择3～5个强活性化合物，采用基底前脑注射鹅蒿蕈氨酸（Ibotenic acid，IBO）致大鼠痴呆模型和Aβ致大鼠痴呆模型进行行为学观察和神经细胞保护研究，发现2～3个具有明显改善学习记忆能力和神经保护作用的化合物；采用SH-SY5Y和PC12等两种不同的细胞株以及APP转基因的小鼠，对体内具有明显神经细胞保护作用的活性化合物进行机理研究，阐明其作用机理，为苯乙醇苷类物质开发成新型神经保护剂奠定坚实的理论基础。本课题对于阐明枇杷叶紫珠的抑制神经细胞凋亡有效成分、构效关系和作用机理以及防治神经退行性疾病药物的发现均有重要意义，具有重要的学术价值和应用前景。

紫珠属植物在我国民间可作药用的有30种，其中24种具有收敛止血，抗菌消炎和清热解毒的功效，在临床上广泛使用，尤其在中风后遗症和血管型痴呆防治中具有良好疗效，然而其药效物质基础尚未明确。针对这一问题，本项目开展了以下研究，并取得一定的成果。.1、化学成分研究：本课题综合运用现代色谱、波谱技术并结合化学手段，对枇杷叶紫珠中的化学成分进行分离、纯化、富集，采用NMR、MS、IR、UV等现代光谱技术对所得化合物的结构进行鉴定。此外，还从四种紫珠属植物（裸花紫珠、全缘叶紫珠、长柄紫珠、藤紫珠）中分离、制备和鉴定了20余个苯乙醇苷类化合物（CPS），其中有4个新化合物，在自然界首次发现了和苯丙素缩合的乌苏烷型五环三萜皂苷类化合物。.2、有效部位制备工艺和质量评价：制定了大孔树脂富集纯化苯乙醇苷类化合物工艺，建立了HPLC法同时测定枇杷叶紫珠中4个苯乙醇苷成分的方法，为后续的活性筛选、药效验证和机制深入研究提供了均一稳定的样品。.3、体内外活性评价研究：建立了体外细胞模型和体内动物模型的相结合的活性评价方法，确定了苯乙醇苷类化合物对谷氨酸损伤的小鼠海马细胞株（HT-22）的保护作用，并能改善由多种化学物质导致的学习记忆功能障碍。.4、抗老年痴呆初步机制研究：本项目从分子和细胞水平对苯乙醇苷类成分的抗老年痴呆作用机制进行了深入研究，发现该类成分能抑制caspase-3活性的升高和抑制ERK蛋白的表达，显著降低caspase-3的荧光强度，并且呈现一定的剂量依赖性，具有神经细胞保护和抗老年痴呆作用。研究结果提示苯乙醇苷类成分对神经细胞内caspase-3的影响以及对ERK蛋白的作用，可能是CPS抗老年痴呆的主要机制之一。