高频碱基替换技术的建立和gat基因的体外定向进化

为解决现行体外蛋白质定向进化技术由于诱变频率低，突变DNA分子多样性受限导致正向突变筛选劳动强度大使应用受限的问题，本项目欲通过dUTP和dITP双介导物的PCR诱变系统建立一个新的体外高频碱基替换技术，这一技术的建立不仅可广泛应用于酶制剂、多肽药物、疫苗等的体外改良，对我国生物技术产业将产生积极影响，潜在有巨大的经济效益，而且为蛋白质、酶结构与功能研究提供一个新的技术平台。同时，本研究试图利用该新技术对具有潜在应用前景的新抗除草剂――草甘膦N－乙酰转移酶（GAT）基因进行体外改良，在研究不同活性GAT突变体酶学性质、酶动力学、结构与功能关系的基础上，筛选具有使用价值的优良gat基因，为研发我国新一代抗草甘膦转基因作物奠定基础。