筛选新型单克隆抗体抑制黑色素瘤的转移

Metastasis of melanoma and other malignant tumors is the .number one enemy that threatens patient life. There have been.many new achievements in using monoclonal antibodies to treat.against various cancers, but we do not have any therapeutic anti-.bodies targeting cancer metastasis so far. Through our scientific .studies on the factors affecting motility of cancer cells, we have.found that the actin polymerization within cancer cells significantly.affects the cell’s fragility and motility. Furthermore, some integrin.monoclonal antibody can inhibit cancer cell motility by enhancing .actin polymerization. To search for a monoclonal antibody that .causes actin polymerization, we propose to immunize the mice with.whole cells of melanoma cell lines. We will then identify each clone.using whole cell ELISA and actin polymerization assay. Antibodies .from positive clones will be used to confirm their ability to inhibit .cancer cell motility and metastasis by in vivo and in vitro assays. .Additionally, we will use subtractive immunization to obtain anti-.bodies specifically targeting metastasis or binding to specific anti-.gens on the cancer stem cell surface. Lastly, we will produce .humanized antibodies by selecting phage library with specific anti-.gen proteins. These antibodies will be repeatedly confirmed for .their safety and effectiveness in vivo. A new type of antibody is .expected to use in clinics to prevent and treat against metastasis .of malignant cancers.

黑色素瘤及其他恶性肿瘤的转移是威胁患者生命的头号敌人。临床上尚无针对肿.瘤转移的治疗性抗体。在研究肿瘤细胞移动能力影响因素过程中，我们发现癌细.胞肌动蛋白聚合可明显影响其变形和运动的能力。某些整合素单克隆抗体能明显.促进癌细胞肌动蛋白聚合并抑制癌细胞的运动能力。为了获得引起肌动蛋白聚合.的新型单克隆抗体，本研究项目提出用黑色素瘤细胞等免疫小鼠。应用全细胞酶.联免疫法和肌动蛋白聚合试验筛选每一个细胞克隆。双阳性克隆进一步用体内，.体外试验证实其抑制肿瘤细胞运动和转移的能力。用减除免疫法免疫小鼠以筛选.出针对有侵袭转移能力的肿瘤细胞或肿瘤干细胞的某些膜表面特异性抗原的单克.隆抗体。最后，我们将用抗原蛋白筛选噬菌体库并生产人源化抗体。获得的人源.化抗体在小鼠体内重复试验以确定其有效性和安全性。新型单克隆抗体可望用于.预防和治疗黑色素瘤等恶性肿瘤。

筛选新型单克隆抗体抑制黑色素瘤的转移的研究已完成前期和中期的大部分工作。通过黑色素瘤细胞免疫小鼠，筛选鉴定单克隆。 目前已获得两株稳定传代的细胞系。其上清液能够抑制A2058黑色素瘤细胞的伸展。初步用Elisa筛选其针对的抗原可能为整合素蛋白的一部分。下一步将进一步明确其在体内的抗肿瘤活性。实验过程中发现融合的效率不高。后续实验中融合前需保持小鼠骨髓瘤细胞处于对数生长期，调整融合比例为5：1，融合过程中添加PEG前尽量使管底的细胞松散，让PEG能够与细胞充分接触。由于2020年初实验室所在地武汉爆发了新型冠状病毒肺炎疫情，课题研究一度陷入完全停滞状态。随后课题组克服困难，调整计划又投入部分资源进行了新型冠状病毒肺炎的科学研究。主要发现包括1. 具有系统性炎症综合症（SIRS）患者入院后死亡风险增加。2. 新冠肺炎死亡患者肺部和脾脏NF-Κb、NLRP-3、IL-18的表达上调。 3. 新冠肺炎死亡患者脾脏细胞凋亡明显增加且可能有细胞焦亡的发生。CD11b和CD68阳性的免疫细胞明显高于对照组。而且新冠肺炎患者超过60%脾脏免疫细胞包括巨噬细胞SARS-COV-2的SPIKE蛋白抗原检测阳性。提示脾脏可能也是SARS-COV-2侵犯的重要靶器官。该研究促进了新冠肺炎发病机制研究。在皮肤肿瘤研究中，明确了CD34highα6-integrinhigh细胞在UV-引起的小鼠肿瘤发生中起到干细胞的作用。此外，我们利用Vps18敲除小鼠研究确定Vps18 促进泛素化蛋白质降解，维持肿瘤细胞生长，是皮肤肿瘤的致癌基因。该研究将对皮肤肿瘤的发病机制和开发靶向药物的研究产生重大影响。. 伴随上述研究，我们一共发表了15篇学术论文。项目直接资助的5篇。培养了2名博士生， 7名硕士生。