雷公藤甲素通过硫酸乙酰肝素多配体蛋白多糖-4调控足细胞损伤防治局灶节段硬化性肾小球肾炎机制研究

Focal segmental glomerulosclerosis（FSGS）is the major cause of chronic renal failure patients on dialysis in China. Syndecan-4 is a new regulation on cell injury pathway,and plays an important role in the incidence of FSGS podocyte injury.Clinical practice has confirmed that triptolide is effective on FSGS, moreover, it can protect podocyte from injury, but the mechanism is unclear. This study aims to analysis and explicit the role and status of Syndecan-4 in FSGS developing by observe the expression level of syndecan-4 in podocytes in experimental and normal rats, clarifies the relation between syndecan-4 and FSGS; In vitro transfection of syndecan-4 raised syndecan-4 gene expression,which intervened by triptolide, reveals the triptolide’s effective mechanism in treatment of FSGS and the syndecan-4 gene expression.The completion of this subject will provide experimental evidence and lay a scientific theoretical foundation for Chinese medicine treatment of FSGS and other podocyte injury -related diseases from the characteristics of great importance to the overall regulation of Chinese medicine.

局灶节段硬化性肾小球肾炎 (focal segmental glomerulosclerosis，FSGS)是我国慢性肾衰透析患者的主要病因。硫酸乙酰肝素多配体蛋白多糖4（Syndecan-4，sdc-4）是细胞损伤通路上的一个新调控点，与FSGS足细胞损伤的发生具有相关性。课题组发现雷公藤甲素对FSGS的疗效确切，且能有效改善足细胞损伤，但雷公藤调控足细胞损伤机制尚未明确。项目拟通过对比Syndecan-4在不同实验组大鼠和正常大鼠足细胞中的表达差异，对比并明确Syndecan-4的表达与FSGS及足细胞损伤中的相关性；通过体外转染Syndecan-4制作稳定高表达Syndecan-4的足细胞模型，并给予雷公藤甲素进行药物干预，揭示雷公藤甲素对Syndecan-4基因表达的调控作用及防治FSGS的机制。为中医药治疗FSGS及足细胞损伤相关疾病提供实验证据和奠定科学的理论基础。

局灶节段性肾小球硬化 (focal segmental glomerulosclerosis，FSGS)是导致终末期肾病（end-stage renal disease，ESRD）的主要病因之一。雷公藤制剂是我科多年来用于治疗FSGS，并且具有确切疗效的药物。本研究主要从细胞和动物水平进行实验，分别建立FSGS动物及PAN诱导的足细胞损伤模型，使用雷公藤甲素进行干预，运用Western&nbsp;Blot法检测syndecan-4、TRPC6、NFAT、uPAR、Integrin β3、Podocin的表达量。同时进行慢病毒转染，研究syndecan-4高表达及低表达对足细胞损伤及药物治疗效果的影响。结果显示：细胞及动物模型均发现，模型组中随着足细胞损伤及肾功能、尿蛋白的进展，syndecan-4蛋白表达升高，与正常组相比P<0.05；药物干预后syndecan-4表达降低，与模型组相比P<0.05。Western&nbsp;Blot检测发现：与正常组相比，模型组肾组织TRPC6、NFAT、uPAR、Integrin β3蛋白表达上升，Podocin蛋白表达下降，差异具有统计学意义；药物治疗后TRPC6、NFAT、uPAR、Integrin β3下降，Podocin上升，以雷公藤甲素高浓度组更明显，与模型组相比P<0.05。构建syndecan-4低表达细胞模型，发现在syndecan-4低表达组中给予PAN处理后，足细胞凋亡较PAN模型组显著减少，podocin表达增加，TRPC6/NFAT/uPAR/Integrin β3通路蛋白表达降低，P<0.05。构建syndecan-4高表达细胞模型，发现syndecan-4高表达可直接引起足细胞凋亡，导致足细胞podocin表达下降，TRPC6/NFAT/uPAR/Integrin β3通路蛋白表达增加，与正常组相比，差异具有统计学意义。给予TP进行干预后，syndecan-4高表达可逆转TP引起的podocin表达上调及TRPC6/NFAT/uPAR/Integrin β3通路的抑制。结论：本实验分别从细胞及动物水平证明足细胞损伤与syndecan-4的表达具有直接相关性，TP通过直接抑制syndecan-4的表达，抑制TRPC6/NFAT/uPAR/Integrin β3通路活化，发挥保护足细胞的作用。