新的肝细胞胆管侧极性分子1F9的抗原鉴定及其参与胆汁排泄的功能研究

肝细胞胆管侧极性分子（HCPMs）是参与肝细胞胆汁排泄的关键分子，其功能障碍或表达缺失可导致严重的肝内胆汁淤积。已知的HCPMs不能完全能解释胆汁排泄的生理过程和肝内胆汁淤积的发病机制，寻找新的HCPMs尤为重要。1F9是本所新发现的特异性识别人HCPM的单抗，免疫组化及电镜显示其抗原在肝细胞中呈极性分布且定位于肝细胞胆管侧内体囊壁上。进一步证实1F9抗原与肝细胞胆管侧内体上目前唯一发现的标志物-HCPM Rab11a明显不同，提示该抗原为新的HCPM，并且其在肝内胆汁淤积性疾病PBC中具有重要的病理诊断价值。本研究拟利用蛋白质组学技术对1F9所识别的抗原进行鉴定，通过生物信息学分析、免疫组化、siRNA和转运实验等方法研究其参与胆汁排泄的分子功能，明确其在肝内胆汁淤积性肝病中的病理诊断价值，为深入阐明肝细胞胆汁排泄生理功能的分子机制以及探讨肝内胆汁淤积性肝病的发病机制提供实验依据。

肝细胞胆管侧极性分子（HCPMs）是参与肝细胞胆汁排泄的关键分子，其功能障碍或表达缺失可导致严重的肝内胆汁淤积。已知的HCPMs不能完全解释胆汁排泄的生理过程和肝内胆汁淤积的发病机制，寻找新的HCPMs尤为重要。1F9是本所发现的特异性识别人HCPM的单抗，免疫组化及电镜显示其抗原在正常肝细胞中呈极性分布，定位于肝细胞胆管侧内体囊壁上,进一步发现1F9抗原对肝内胆汁淤积性疾病PBC具有重要的病理诊断价值，但1F9抗原的本质不清。本项目围绕1F9抗原的鉴定及其在PBC中的异常表达进行研究。首先，通过蛋白质组学技术，尤其是质谱分析技术，成功获得1F9候选抗原；其次，通过免疫沉淀结合Western blot分析、连续正常组织芯片、激光共聚焦、真核表达系统及免疫电镜检测等手段，层层深入、不断完善，最终得出LAMP-2分子为1F9抗原的结论；最后，通过免疫组化、Q-PCR、ELISA、免疫电镜等方法，从蛋白水平、mRNA水平、血清学、亚细胞定位等不同角度，较细致地探讨了LAMP-2在胆汁淤积性疾病PBC中的异常表达，为深入探讨LAMP-2参与PBC的机制奠定了坚实的理论基础。