新疆紫草水溶性成分的体内外抗HIV作用及机制研究

课题组证明了新疆紫草中4个水溶性提取物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ对HIV-1整合酶,Ⅱ对逆转录酶的抑制活性;在MT-2细胞系Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、、Ⅳ对HIV-1有抑制活性。从相应的组分中分离出了A、B、C 3个单体化合物，其中C[2－（3′－甲氧基－4′－羟基）－苯基－3－羟甲基－6－甲氧基－5－苯并呋喃甲酸]为新化合物。C在MT-2细胞系对，对HIV感染的MT-2细胞有明显的抑制作用，其浓度与细胞保护率呈量效关系,毒性小，水溶性好。本课题拟通过小鼠AIDS模型观察C的体内抗HIV作用，体外药效观察对感染细胞的保护和毒性以及对感染细胞中病毒复制和3个关键酶的抑制作用，对腹腔巨噬细胞吞噬功能等指标的影响研究，观察对免疫系统的调节作用。最终阐明C的抗HIV作用及机理，为从紫草中寻找新的抗HIV药物或先导化合物提供实验依据。课题已有扎实的前期研究基础，实验手段成熟，设备齐全，技术力量雄厚，结构合理。

目的 （1）研究新疆紫草(Arnebia euchroma (Royle) Johnst)水溶性成分[2，3-二氢-2-（4′-羟基-3′-甲氧基苯）-3-羟甲基-6-甲氧基苯并呋喃-5-羧酸，2-（4′-hydroxy -3′-methoxy）-phenyl-3-hydroxy- methyl -6-methoxy -2,3-dihydro-benzo furan-5-formic acid，简称PHFD]的体外抗HIV作用及免疫调节作用；（2）研究PHFD人工合成方法。（3）合成产物的体外抗HIV作用研究。方法 （1）以环磷酰胺造小鼠免疫抑制模型，分別给于新疆紫草水、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取物观察其对免疫功能的影响。（2）以香草醛和4-羟基-2-甲氧基苯甲醛为原料，采用Knoevenagel缩合，酯化，交叉氧化偶联法，通过优化脱水剂的用量建立合成中间体(E)-3-(4-羟基-2-甲氧基苯基)丙烯酸甲酯（Ⅰ）的方法，（3）以氧化偶联反应为基础，建立合成苯并二氢呋喃骨架（Ⅱ）的方法，考察4种不同氧化剂对Ⅱ产率的影响。结果 （1）水提物各剂量组的各项免疫指标较模型组均有显著升高(P<0.01)，脾脏和胸腺组织形态病变程度减轻。（2）中间体Ⅰ的最终合成条件为 Ⅰ与脱水剂EDC•HCl为1:1.5， 40℃反应4h时，收率最高；(3)以二氧化铅为氧化剂合成得到的苯并二氢呋喃类化合物产率最高，易于分离。同法合成了6个中间体化合物，分别为化合物6：(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基) 丙烯酸、化合物7：(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基) 丙烯酸甲酯、化合物9：(E)-3-(4-羟基-2-甲氧基苯基) 丙烯酸、化合物8：(E)-3-(4-羟基-2-甲氧基苯基) 丙烯酸甲酯、化合物11：2-（3-甲氧基-4-羟基苯基）-3-甲氧羰基-5-羧基乙烯基-6-甲氧基-2,3-二氢苯并呋喃以及化合物4：2-（3-甲氧基-4-羟基苯基）-3-甲氧羰基-5-甲氧羰基乙烯基-6-甲氧基-2,3-二氢苯并呋喃；结论 (1) 新疆紫草水提部位对环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫功能具有保护作用，对非特异性免疫、体液免疫和细胞免功能具有一定的促进作用;(2)化合物4及11对HIV-1蛋白酶有较弱的抑制作用。