吉氏巴贝斯虫cDNA文库的构建及表达的研究

本研究工作包括：1、采用低渗裂解法和二步离心法由犬红细胞中提取有活力的吉氏巴贝斯虫虫体，以异硫氰胍变性法提取总RNA，磁性分离技术提取mRNA，以反转录法合成了双链cDNA文库并构建出吉氏巴贝斯虫cDNA文库，免疫学筛选表明，文库中表达阳性的重组子占总重组子的8.9%。2、将6.6kb的吉氏巴贝斯虫cDNA片段以光照活化法标记光敏生物素，制备出了吉氏巴贝斯虫cDNA探针，打点杂交试验表明，可检出0.001ng的吉氏巴斯虫基因组DNA并有良好特异性。3、设计出一对特异引物，由吉氏巴贝斯虫cDNA文库中克隆出ssrRNA序列，并测定了该序列的核苷酸组成，建立了吉氏巴贝斯虫PCR诊断法，该法具有特异、敏感、操作简便的优点。