内质网分子伴侣ERp57在非酒精性脂肪性肝病中的作用及机制研究

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是近年来影响人民生活健康的常见肝病之一。最新研究发现，内质网应激在NAFLD的发病过程中发挥重要作用。我们前期的研究运用定量蛋白质组学方法发现高脂饮食能诱导NAFLD大鼠肝脏蛋白质二硫键异构酶A3前体（ERp57）的表达上调。作为内质网重要的分子伴侣之一，ERp57表达上调能减轻内质网应激诱导的细胞凋亡，但其在NAFLD中的作用尚未见文献报道。本研究拟采用重组腺病毒和RNAi等手段，通过体外和体内两个水平，分别探讨ERp57表达增强或表达抑制对于肝细胞脂肪变性程度的影响，并进一步研究ERp57表达改变对于肝细胞凋亡水平的影响，同时通过检测内质网应激诱导凋亡的相关分子caspase-12, CHOP, Ire1的表达水平，揭示ERp57对于内质网应激诱导的肝细胞凋亡的保护作用及可能机制。本课题的顺利实施将为深入认识NAFLD的分子机制，发现新的治疗靶标做出有益

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是近年来影响人民生活健康的常见肝病之一。近年来研究发现，内质网应激在NAFLD发生发展过程中发挥重要作用，其确切分子机制尚未明确。本课题旨在分析内质网分子伴侣蛋白质二硫键异构酶A3前体（PDIA3）在NAFLD中的作用及分子机制。我们运用高脂饮食喂养SD大鼠复制NAFLD动物模型；采用差异凝胶电泳技术联合质谱鉴定技术，发现肝脏PDIA3表达水平随着NAFLD疾病进程逐渐上升。在上述研究基础上，我们采用RNA干扰、免疫印记、细胞凋亡检测等分子生物学手段，系统研究内质网分子伴侣PDIA3在NAFLD发生发展过程中的作用及分子机制。主要结果如下：（1）用软脂酸培养人肝细胞株L02细胞成功诱导NAFLD细胞模型；（2）PDIA3在NAFLD细胞模型中表达上调；（3）采用siRNA抑制L02细胞PDIA3表达加重高脂培养基诱导的肝细胞脂肪变性程度，其可能分子机制为：PDIA3表达抑制抑制PPARα表达，减少脂肪酸β氧化，从而加重肝细胞脂肪变性；（4）采用siRNA抑制L02细胞PDIA3表达加重高脂培养基诱导的内质网应激和肝细胞凋亡，其可能分子机制为：PDIA3表达抑制促进内质网应激，进而诱导caspase-12表达，激活凋亡信号通路，从而导致肝细胞凋亡；（5）运用血清蛋白质组研究方法，发现血红蛋白可能是NAFLD的预警指标。本课题的顺利实施为深入认识NAFLD的分子机制，发现新的治疗靶标提供了理论依据。