microRNA-34a在非酒精性脂肪性肝病中的作用及机制研究

miRNA是一类具有重要调节功能的小分子RNA，其在肝脏疾病中的作用近年来逐渐受到关注。本课题组的前期研究发现， miR-34a的表达在不同NAFLD动物模型肝脏中均显著上调；生物信息学分析结合文献检索发现，YY1、ACSL4和SIRT1为miR-34a的三个潜在靶标基因。为了进一步揭示miR-34a在NAFLD中的调控作用及其机制，本研究拟采用软脂酸诱导L02细胞建立NAFLD细胞模型，用高脂饮食喂养C57小鼠构建NAFLD动物模型，采用重组腺病毒、RNAi和反义寡核苷酸等技术，通过离体和在体两个水平，探讨miR-34a表达变化对肝细胞脂变程度的影响，并进一步分析miR-34a对潜在靶标基因YY1、ACSL4和SIRT1，以及下游SREBP-1c、ATP和PPARα等效应分子表达的影响。本项目的实施，将为深入认识NAFLD的具体机制提供新的理论依据，并可能为开辟新的治疗方法作出有益尝试。

本研究旨在发掘并分析miR-34a在非酒精性脂肪性肝病中的机制及作用，发掘并分析miR-34a的作用靶标，寻找潜在的治疗靶点。本研究采用游离脂肪酸(flee fatty acid，FFA)诱导L02细胞建立NAFLD细胞模型，用高脂饮食(high fat diet，HFD)喂养C57BL/6小鼠构建NAFLD动物模型。发现在NAFLD细胞和小鼠肝组织中miR-34a的表达水平显著上调。通过体外转染miR-34a inhibitor或小鼠尾静脉注射miR-34a基因敲减慢病毒载体的方式来进行功能实验。L02细胞胞浆及肝脏组织中脂滴沉积的程度得到显著改善，甘油三酯的含量明显下降，小鼠肝重/体重比值显著下降，小鼠血清中AST水平显著降低；采用在线数据库预测发现PPARα是miR-34a可能的调控靶基因。进一步荧光素酶报告系统分析证实PPARα是miR-34a的直接作用靶点，其3'-UTR中存在miR-34a调控的作用序列。PPARα的下游脂变相关基因的表达随着PPARα的改变而改变。本课题的实施，为揭示非酒精性脂肪肝的发生机制及探寻其有效治疗方法提供了依据。