甲基CpG结合蛋白介导骨肉瘤凋亡相关印迹基因TSSC3表达沉默的机制研究

骨肉瘤高发的转移率是影响其疗效的主要因素，而获得失巢凋亡抵抗能力是转移一系列步骤中首要的关键步骤。前期工作中，我们发现印迹基因TSSC3启动子区高甲基化介导的表达沉默在骨肉瘤细胞获得失巢凋亡抵抗中起着至关重要的作用；目前研究发现甲基CpG结合蛋白与肿瘤中抑癌基因启动子高甲基化CpG岛结合是导致基因沉默的主要原因，并且MBD蛋白的作用可能具有肿瘤细胞选择性及基因选择性，提示MBD蛋白分子可作为针对表观遗传修饰治疗的更具特异性的新靶点。本课题拟用染色体免疫沉淀分析技术分析MBD蛋白与TSSC3基因启动子高甲基化CpG岛的结合情况；并采用RNAi技术，研究沉默特异MBD蛋白分子后TSSC3基因表达变化情况及骨肉瘤细胞失巢凋亡的变化情况。结果将阐明MBD蛋白介导TSSC3基因表达沉默的基本情况，为以TSSC3相关MBD蛋白为靶点、以恢复失巢凋亡为目的的抗骨肉瘤转移治疗提供理论依据。

明确三种MBD蛋白分别与骨肉瘤细胞TSSC3基因启动子的结合情况；MECP2蛋白与TSSC3基因启动子结合力相对最强；shRNA慢病毒靶向干扰MECP2分子成功；靶向干扰MECP2分子后，骨肉瘤细胞saos2、u2os凋亡率增加，侵袭、迁移、增殖力明显减弱；裸鼠成瘤能力有差异；通过表达谱基因芯片技术，初步筛选出慢病毒 MECP2-shRNA靶向干扰骨肉瘤saos2细胞株后与变化生物学功能相应的差异表达基因 （IGFBP4、HOXC8、LMO4、 MDK、CTGF）； 其中IGFBP4基因转录水平升高，若后续实验证实骨肉瘤saos2细胞中IGFBP4 基因启动子甲基化程度高（正在进行BSP实验），结合芯片结果可说明 骨肉瘤saos2细胞中IGFBP4基因为MECP2的特异靶向分子，从而通过抑制MECP2可提高IGFBP4（抑癌基因）表达水平，从而改变骨肉瘤肿瘤细胞生物学效应。