TLR2基因多态及启动子区DNA甲基化与Hp感染型胃癌预后的关系及机制研究

Gastric Cancer is one of the serious public health problems related to cancer in China. The patients with advanced or metastatic gastric cancers often have poor prognosis, Therefore, it’s important to identify the new biomarker for assessing the prognosis in patients of gastric cancer. TLR2 is a key factor in the process of innate immune response. It can be combined with ligand from microbial surface and other ligands of cell damage products, extracellular matrix, inflammatory mediators from the host, then promote the occurrence and progress of gastric cancer. We use the epidemiology methods and a gastric cancer cohort to clarify the association between TLR2mRNA and protein expression of gastric cancer. Using genotyping and MassARRAY technique to explore the relationship between TLR2 polymorphisms and DNA methylation in promoter region and prognosis of gastric cancer, to evaluate the status of Hp infection in patients with gastric cancer, to analyze the interaction of TLR2 gene polymorphism, DNA methylation and protein expression with Hp infection in the prognosis of gastric cancer. Meanwhile, we use the biostatistics methods and laboratory studies to examine the regulatory mechanism of TLR2 expression in gastric cancer by SNPs and DNA methylation in TLR2 promoter region. Thus, our study will provide insight on successful estimate the prognosis of gastric cancer by TLR2 molecular, identification the beneficiaries of monoclonal antibody drugs, and promote the precision medicine in gastric cancer.

胃癌是我国癌症相关的严重公共卫生问题之一，晚期及转移性胃癌患者预后仍然不佳，因此发现与胃癌长期预后相关的分子标志物尤为重要。TLR2是天然免疫应答过程中的关键因子，可以同时与来自微生物表面的配体及宿主体内的细胞损伤产物、细胞外基质、炎症介质等多种配体结合，进而促进胃癌的发生和进展。本研究拟通过流行病学方法，利用胃癌生存队列，分析TLR2基因和蛋白与胃癌预后的关系，采用基因分型和MassARRAY技术，探讨TLR2基因多态性及启动子区DNA甲基化对胃癌预后的影响；评估胃癌患者Hp感染状态，分析TLR2基因多态性、DNA甲基化及蛋白表达与Hp感染在胃癌预后中的交互作用；同时采用生物统计学方法和实验室研究，探索TLR2启动子区基因多态性及DNA甲基化对胃癌中TLR2表达的作用机制，为综合评估TLR2分子对胃癌预后的预测作用，筛选靶向药物的受益患者，实现胃癌的精准治疗提供依据。

胃癌是我国癌症相关的严重公共卫生问题之一，晚期及转移性胃癌患者预后仍然不佳，因此发现与胃癌长期预后相关的分子标志物尤为重要。TLR2是天然免疫应答过程中的关键因子，可以同时与来自微生物表面的配体及宿主体内的细胞损伤产物、细胞外基质、炎症介质等多种配体结合，进而促进胃癌的发生和进展。本研究通过流行病学方法，利用胃癌生存队列，分析TLR2蛋白与胃癌预后的关系，发现胃癌肿瘤组织中TLR2的表达与较差的生存率相关（HR=1.50,95%CI：1.06-2.12）；采用时间飞行质谱技术，发现TLR2 rs3804100位点TT基因型与胃癌不良预后相关；与CC+CT基因型相比，TT基因型胃癌患者死亡风险升高了26.2%（HR=1.262，95%CI：1.006-1.582）；采用MassARRAY技术，发现TLR2基因启动子区域DNA甲基化水平的增加，特别是CpG 5或CpG 23位点的增加，可能抑制了TLR2的表达。荧光素酶报告基因实验结果显示，HEK293T细胞中SP1的表达增加了TLR2启动子的活性进一步通过CHIP试验证实，SP1可以与TLR2的启动子区结合，并且上调TLR2基因的表达。对H. pylori感染状况进行分层分析，发现不同的H. pylori感染状况下，TLRs基因多态性与胃癌的预后均没有关联。本研究结果全面评估了TLR2基因多态性、DNA甲基化及蛋白表达在胃癌预后中作用；同时采用生物统计学方法和实验室研究，为综合评估TLR2分子对胃癌预后的预测作用，筛选靶向药物的受益患者，实现胃癌的精准治疗提供依据。