融合抗菌肽用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌皮肤感染的作用机制研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）造成的难治性皮肤感染是当前临床上面临的严峻挑战。抗菌肽是可望用于应对耐药病原体感染的候选策略之一，但其作用机制尚未明确，尤其体内治疗作用及机制更是知之甚少。本课题组前期研究发现抗菌肽治疗效果主要由直接杀菌作用和抗菌免疫调节作用共同决定，由此，在杀菌肽制剂中加入免疫调节肽组分可望增强抗菌肽的治疗效果。.为验证前期工作提出的假设，我们拟应用杀菌肽-免疫调节肽融合策略应对MRSA皮肤感染，从细胞实验、体内局部作用及体内整体免疫状况检测3个方面进一步分析研究融合抗菌肽对MRSA皮肤感染的作用机制。通过融合肽对MRSA及宿主细胞的直接作用、对MRSA所致皮肤感染的局部炎症细胞募集和免疫分子表达调控以及对机体整体Th1/Th2免疫平衡的影响分析，验证我们提出的融合抗菌肽的效用机制。同时对其应用安全性机制进行分析，为进一步研发抗菌肽治疗耐药病原体感染奠定基础。

本项目完成了杀菌肽人β防御素3和甘露聚糖结合凝集素融合肽hBD3-MBL对MRSA的直接杀菌作用以及MRSA感染HEK293细胞的保护作用。结果显示：（1）融合肽hBD3-MBL对于MRSA感染的小鼠局部皮肤感染模型的病灶愈合有促进作用，这一促进作用部分通过对炎症反应的抑制以及Th1/Th2型免疫反应平衡的影响来实现。（2）提出糖类结合域CBD有助于改善hBD3的效能。将hBD3和CBD相融合所得的融合肽对MRSA的杀灭作用和稳定性、对于MRSA耐药基因mecA的抑制作用均高于单一肽hBD3。（3）由于化学合成抗菌肽的稳定性差、成本高昂，本项目还尝试以真核表达的方式获得融合抗菌肽hBD3-CBD，并将其用于上述抑菌试验。所得的实验结果与化学合成抗菌肽的结果相似，表明真核表达方式也是抗菌肽未来应用的方向之一。总体而言，目前抗菌肽研究的现实目标应该是协助抗生素用于杀菌抑菌，以降低抗生素的应用，缓解耐药性的产生和扩散。.本项目研究中发现，抗菌肽对MRSA的直接杀菌作用结果所受到的影响因素较多，而对于感染宿主-葡萄球菌-抗菌肽-外部环境各方面的相互作用还知之甚少。因此下一步的目标是探讨在不同环境下，抗菌肽与葡萄球菌的相互作用、抗菌肽的高级结构对其杀菌抑菌作用的影响，以及葡萄球菌对抗菌肽作用的应激反应。.同时，本项目还协助完成了基于coa序列高变区的医院感染MRSA的新分型方法、抗菌材料壳聚糖季铵盐对MRSA的抑菌作用，发现了MRSA临床株中的新的噬菌体JD007，并对其进行了测序。