缺血后处理延长脑缺血再灌注治疗时间窗及机制研究

溶栓治疗是临床公认的恢复缺血脑组织血流和功能的最有效治疗手段之一，然而溶栓治疗有严格的时间窗限制，延迟的血管再通会导致再灌注损伤。因此研究重点转为如何减轻再灌注损伤。最新的研究显示"缺血后处理"是有效减轻再灌注损伤的非药物方法，但关于缺血后处理的治疗时间窗基本没有研究。本课题宗旨在于采用线栓法建立更符合人类常见缺血性卒中类型的大鼠可逆性缺血后处理模型，进一步深入研究缺血后处理减轻再灌注损伤延迟溶栓治疗的时间窗及治疗机制，为临床应用提供理论依据。我们应用大鼠MCAO模型，2h缺血后给予双侧反复10秒的颈动脉夹闭、放松后处理，观察缺血后处理的脑保护作用、治疗时间窗以及保护作用机制。此课题的创新之处在于对缺血后处理的治疗时间窗进行研究，为临床应用提供理论依据。此"缺血后处理"具有较高临床应用的可行性，能够较快应用于临床，提高缺血性脑血管病患者的预后。

缺血性脑血管病是神经系统的常见病，具有极高的发病率、致残率和致死率，如何对该病进行防治，减轻社会及家庭的严重负担，是当前缺血性脑血管病研究的重点。.溶栓治疗是临床公认的恢复缺血脑组织血流和功能的最有效治疗手段之一，然而溶栓治疗有着严格的时间窗限制。美国国立神经与中风研究中心将溶栓时间窗定义为缺血性卒中发生后3h内；欧洲卒中组织建议急性缺血性卒中4.5h内进行溶栓处理；我国经多中心临床实验，将6h作为缺血性卒中溶栓治疗的时间窗。溶栓治疗一旦超过时间窗，即便血管再通，脑损伤仍可继续加剧，引起 “脑缺血再灌注损伤”。最新研究显示“缺血后处理”是有效减轻再灌注损伤的非药物方法，但关于缺血后处理的治疗时间窗基本没有研究。.本课题采用线栓法建立更符合人类常见缺血性卒中类型的大鼠大脑中动脉栓塞模型，于再灌注即刻给予缺血后处理，观察缺血后处理的脑保护作用、治疗时间窗及保护作用机制。本课题分两部分进行，第一部分对单纯脑缺血再灌注组和脑缺血再灌注合并缺血后处理组大鼠分别实施2h、3h、4h、4.5h、6h的脑缺血处理，观察缺血后处理对不同组大鼠脑缺血/再灌注48h后神经功能评分、脑梗死体积和脑水肿程度的影响，寻找有效的治疗时间窗。结果发现，缺血后处理能减轻急性脑缺血再灌注损伤，表现为神经功能缺损改善、脑梗塞体积和脑水肿程度减轻，但这种保护作用会受到脑缺血时间的限制，随着脑缺血时间的延长后处理的保护作用会逐步降低，其保护作用的有效时间窗为脑缺血4.5h以内。第二部分依据第一部分实验结果，选择一个梗死面积和神经功能评分与缺血2h再灌注组无明显差异的最远时间点，即4.5h，提取不同时间点大鼠脑组织，应用分子生物学方法检测脑缺血/再灌注组及脑缺血/再灌注合并缺血后处理组在2个缺血时间点时大鼠缺血侧皮层内TLR2和TLR4蛋白、mRNA及细胞凋亡的表达变化。结果发现，缺血后处理在2h缺血时间点能有效抑制缺血侧皮层的细胞凋亡及TLR2和TLR4的表达，说明缺血后处理通过抑制脑缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡和炎症反应来实现脑保护作用。.本课题首次论证了缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的治疗时间窗为脑缺血4.5h以内；同时，在不同缺血时间点内将Toll样受体（TLR2、TLR4）与缺血后处理对抗脑缺血再灌注损伤机制联系起来，证实了缺血后处理在一定缺血时间窗内可抑制Toll样受体的表达以实现脑保护。