神经酰胺酶基因SiRNA与FasL基因共转导联合放疗治疗头颈肿瘤的实验研究

Fas及其配体FasL的 Fas系统是调控肿瘤细胞凋亡的重要途径。外源导入FasL基因进行头颈鳞癌实验治疗取得良好疗效，但疗效不尽相同。FasL与Fas结合，启动凋亡级联反应，诱导表达Fas的肿瘤细胞凋亡。除凋亡级联反应中的Caspases家族外，神经酰胺作为细胞凋亡胞内信号，是Fas系统诱导线粒体II型凋亡的关键介质。神经酰胺的代谢水平直接影响FasL基因治疗的效果。神经酰胺酶是参与神经酰胺降解反应的关键酶类，通过导入SiRNA干扰神经酰胺酶的合成，提高神经酰胺水平，提高Fas系统的诱导凋亡作用和肿瘤的放疗敏感性。本研究利用腺相关病毒载体将Egr-FasL基因和神经酰胺酶基因SiRNA导入头颈肿瘤瘤体内，并与放疗结合。观察该综合治疗对体外及小鼠体内头颈肿瘤细胞的抑瘤作用及与放疗的协同作用,以期为晚期头颈肿瘤的个体化综合治疗探索新的有效治疗途径。

Fas/FasL系统是调控肿瘤细胞凋亡的重要途径。外源导入FasL基因进行头颈鳞癌实验治疗取得良好疗效，但疗效不尽相同。神经酰胺作为细胞凋亡胞内信号，是Fas系统诱导线粒体II型凋亡的关键介质。通过导入shRNA干扰神经酰胺酶的合成，提高神经酰胺水平，可提高Fas系统的诱导凋亡作用。本研究利用慢病毒载体将FasL基因和神经酰胺酶基因shRNA导入头颈肿瘤细胞及瘤体内，并与放疗结合，观察该综合治疗对体外及小鼠体内头颈肿瘤细胞的抑瘤作用及与放疗的协同作用,以期为晚期头颈肿瘤的个体化综合治疗探索新的有效治疗途径。主要结果有：（1）筛选出了能特异性抑制神经酰胺酶表达的shRNA序列，这个序列能在mRNA水平上特异性下调神经酰胺酶的表达，进而降低其蛋白表达。（2）用RNA干扰的方法降低细胞内神经酰胺酶的表达水平，对细胞的增殖有一定的抑制作用。（3）验证了FasL对体内外头颈肿瘤细胞具有明显的杀伤作用。（4）降低细胞内神经酰胺酶的表达对提高FasL的疗效效果不明显，可能与两者的作用水平及作用时间有关，目前正在做进一步研究。（5）探索到SCCⅦ肿瘤小鼠的最佳放疗条件，照射剂量为8Gy时对SCCⅦ肿瘤生长的抑制最明显。放疗联合FasL治疗能够有效抑制瘤体生长，延长小鼠生存期。