内皮微粒表达的Shh抑制信号在aGVHD发病机制中的作用

内皮细胞损伤在aGVHD启动和进展中发挥重要作用，内皮损伤释放的内皮微粒（EMPs）是放大免疫炎症反应、导致aGVHD进展的关键环节。EMPs参与aGVHD的作用机制尚不清楚。细胞毒T细胞及自然杀伤细胞通过Fas/FasL途径杀伤靶细胞是aGVHD的重要损伤机制，我们的前期研究提示，EMPs的病理作用与 Fas／FasL途径诱导的细胞凋亡密切相关。研究证实，Shh信号是靶细胞Fas表达的重要调节途径，抑制Shh信号能上调细胞Fas表达，激活Shh信号则下调细胞Fas表达。为此，我们提出EMPs可能通过表达Shh抑制信号扩大损伤作用，导致内皮损伤加重和aGVHD进展的全新假说。本项目拟在揭示EMPs参与的内皮损伤在aGVHD发病作用的基础上，以Shh信号为靶向，采用激活Shh信号途径，通过阻断Fas／FasL杀伤作用，干预aGVHD内皮损伤，探寻防治aGVHD的新策略。

近年来，内皮损伤被认为在急性移植物抗宿主病（aGVHD）的启动和发展中起关键作用，如果能深入阐明aGVHD发生过程中内皮损伤的机制并阻断内皮细胞损伤，将对aGVHD的防治有重大的意义。内皮微粒（EMPs）是内皮损伤的标志，同时携带多种生物学信息，影响细胞的生物学功能，具有促凝、促炎、加重内皮功能障碍等多种病理作用，但EMPs参与aGVHD发生的机制尚不清楚。Sonic Hedgehog(Shh)信号通路对内皮细胞的生存和功能具有重要的作用，HH相互作用蛋白（HHIP）是该途径的一个抑制性蛋白，Shh与其结合，阻止下游靶基因转录，传导Shh抑制信号。HHIP在内皮细胞高表达，然而HHIP在aGVHD内皮损伤中作用如何，它与EMPs的功能是否有关还有待研究。我们通过一系列的研究发现：在接受allo-HSCT的aGVHD患者中，EMPs的水平自移植后开始逐渐升高，并明显高于正常对照和no-aGVHD患者，提示EMPS可能参与aGVHD的发生。EMPs体外干预内皮细胞诱导内皮损伤包括细胞凋亡和内皮功能障碍，提示EMPs在aGVHD内皮损伤中起到扩大损伤的作用。在EMPs检测到HHIP蛋白高表达，siRNA沉默HHIP表达的EMPsHHIP-对内皮细胞无损伤作用，并且Shh途径激动剂SAG能逆转EMPs的内皮损伤作用，提示EMPs对内皮细胞的损伤作用是通过携带HHIP抑制目的内皮细胞的Shh信号途径介导的。在aGVHD模型小鼠，也发现存在严重的内皮损伤，用辛伐他汀阻断小鼠的内皮损伤后，小鼠aGVHD的症状得到明显改善。因此，阻断内皮损伤对aGVHD的诊治有巨大的潜在意义，而EMPs及其携带的Shh抑制信号有望成为阻断aGVHD内皮损伤的新靶点。将来的研究目标是根据目前的研究基础，发展出相应的药物或治疗手段，改善aGVHD的内皮损伤，最终达到预防和治疗aGVHD的目的。