γ干扰素诱导微血管内皮细胞表达Galectin-9抑制肺aGVHD的作用及机制研究

活化的效应T细胞向靶器官迁入的过程对aGVHD的发生有决定性意义。最近研究发现IFN-γ和血管内皮细胞参与抑制T细胞向肺组织迁入。我们在微血管内皮细胞(MEC)研究发现，IFN-γ诱导下肺MEC较小肠MEC高表达活化T细胞凋亡诱导配体Galectin-9，差异显著。这一现象国内外未见报道，提示高表达Galectin-9的肺MEC可能是特异性抑制肺aGVHD的重要因素。本课题拟①通过体外实验，研究IFN-γ诱导不同器官来源MEC表达Galectin-9的差异性，探索其分子机制；②通过动物实验，建立小鼠骨髓移植模型并结合内皮细胞特异性转染技术，研究沉默Galectin-9和强制性高表达Galectin-9后MEC对肺aGVHD的影响。通过本研究可望阐明IFN-γ诱导下肺MEC在aGVHD中的作用和机制，完善aGVHD免疫调节理论，为临床早期阻断靶器官损害提供新的实验依据。

本研究课题利用基因敲除小鼠研究平台，通过研究IFN-γ对Tim-3和Gal-9的影响，进而研究不同T细胞亚群在小鼠肺急性GVHD发生中的作用。并探讨了治疗的可能手段。研究主要内容包括：1. 建立小鼠骨髓移植后aGVHD模型并研究多个靶器官的病理及功能改变；2. 研究Th1、Th2、Th17等细胞亚群在小鼠肺aGVHD发生中的作用；3. 在体实验研究Tim-3、Gal-9以及Th1、Th2、Th17等肺部浸润细胞亚群的关系；4. 在体实验利用KO小鼠的研究特点，探讨IFN-γ对Tim-3和Gal-9的影响；5. 离体实验分离纯化小鼠支气管上皮细胞，研究其Gal-9表达与IPS的关系；6. 探讨中药来源的纯化药物雷公藤内酯醇对小鼠IPS的影响及其机制分析。主要研究结果：1. 成功建立小鼠半相合骨髓移植后急性移植物抗宿主病模型。2. 进行肺组织病理评分，可见IFN-γ KO小鼠为供者或IFN-γR KO为受者时，肺内大量免疫细胞浸润，为典型IPS病理表现。3. 肺组织超微病理显示，IFN-γR KO为受者时出现典型IPS改变。4. 流式细胞术分析结果发现在IPS发生时，肺内大量CD4+、CD8+T细胞以及单核细胞浸润。5. 免疫荧光标记检测肺组织T细胞浸润，显示IFN-γ KO小鼠为供者或IFN-γR KO为受者时，肺内大量T细胞浸润，无Galectin-9表达。6. 体外小鼠原代支气管上皮细胞（BEC）分离培养及鉴定，获得纯化的BEC。7. IFN-γ诱导原代BEC表达Galectin-9的检测，结果发现诱导后BEC表达Galectin-9呈剂量和时间依赖性；8. Galectin-9+ BEC与体外活化T细胞共培养，检测细胞凋亡结果发现，Galectin-9+ BEC诱导活化T细胞凋亡，这种诱导可以被Galectin-9的配体聚合物Tim-3-Fc所阻断。9. Tunel法检测组织内T细胞凋亡，在T细胞较少浸润的肺组织，T细胞凋亡也很少。提示Galectin-9对T细胞的凋亡诱导并非抑制IPS的唯一机制。10. 雷公藤内酯醇通过下调IL-17，抑制IFN-γ敲除供者造血干细胞移植后IPS。.发表文章情况：(在本基金项目的资助下完成SCI 5篇，中文核心1篇) ；大会发言：（国家级学术会议 2次口头发言）；培养研究生情况：（已毕业2名，1名在读）。