Id3在肺腺癌中的表达分析及其对A549肺腺癌细胞增殖影响的机制研究

Id3作为一种重要的转录调控因子，参与包括发育、肿瘤发生、细胞增殖和凋亡等过程。本课题拟在前期体外研究Id3诱导A549细胞增殖抑制的基础上，研究Id3蛋白在活体人肺腺癌组织中的表达情况，并与肿瘤分期（Ⅰ-Ⅳ期）及肿瘤分化程度（高、中、低）作相关性分析。用腺病毒载体将Id3基因导入A549细胞过表达，将该细胞接种裸鼠建立裸鼠皮下肺腺癌移植瘤模型，观察Id3基因过表达对小鼠移植瘤生长的影响；观察Id3重组腺病毒直接原位注射对裸鼠移植瘤生长的影响。采用Affymetrix GeneChip表达谱芯片等技术，分析和确认转基因前后A549细胞内与增殖或凋亡相关的差异表达基因，找出起关键作用的调控分子。上述工作将首次探讨Id3检测在人肺腺癌分期和分化程度判断中的意义，系统研究Id3对肺腺癌生长的影响及其分子作用机制，希望为探寻肺腺癌新的实验病理学指标及治疗分子靶标提供一定的理论和实验依据。

Id3作为一种重要的转录调控因子，参与包括发育、肿瘤发生、细胞增殖和凋亡等过程。本课题在前期体外研究Id3诱导A549细胞增殖抑制的基础上，进一步研究Id3蛋白在活体人肺腺癌组织中的表达情况；研究腺病毒介导的Id3转基因表达对裸鼠致瘤作用的影响；分析转基因前后A549细胞内差异表达基因。结果如下：1) 将Id3重组腺病毒（Ad-Id3）及对照载体Ad-LacZ分别感染A549细胞，于裸鼠皮下注射Ad-Id3-A549、Ad-LacZ-A549及A549细胞。四周后A549及Ad-LacZ对照组皮下移植瘤生长体积分别为142.18±54.52mm3和85.78±59.70mm3，显著高于Ad-Id3-A549组移植瘤体积（2.22±0.70mm3）。提示Ad-Id3感染A549细胞后接种小鼠，可明显抑制细胞的致瘤性生长。2）将Id3基因导入A549细胞可诱导增殖抑制和凋亡；将靶向Id3基因的miRNA干扰质粒（pcDNA/miRId3）和pEGFP/Id3共转染A549细胞，可以逆转Id3基因表达致A549细胞增殖抑制和致凋亡作用。3) 细胞划痕试验和侵袭小室法结果显示， pEGFP/Id3转染组细胞迁移数及侵袭性均明显低于空白对照组和pEGFP转染组。4) Affymetrix基因表达谱芯片结果显示，与pEGFP转染组比较， pEGFP/Id3转染组细胞共有1981个表达差异3倍以上的基因，其中有938个基因表达上调，1043个基因表达下调。5) 间接免疫荧光和酶免疫组织化学染色技术结果表明，Id3蛋白在A549细胞中呈低表达水平，主要表达在细胞核；肺腺癌组织标本中的阳性表达率为76.7%，Id3蛋白表达程度与肺腺癌的病理分化程度有关。6) 人前列癌细胞PC-3M内Id3表达量较A549显著增强；前列腺癌组织中的Id3的阳性表达率明显高于前列腺增生组织；Id3表达程度与前列腺癌的Gleason分级评分显著相关。 .上述工作首次探讨Id3在人肺腺癌的表达及其意义；在体内外系统研究Id3对肺腺癌生长的影响并初步研究分子作用机制，希望为探寻肺腺癌新的实验病理学指标及治疗分子靶标提供一定的理论和实验依据。本研究结果已在国际性学术刊物上发表论文3篇，待发表1篇；国内刊物发表论文5篇，待发表2篇。获国家发明专利1项。参加国内外学术交流9人次。培养博士生1人，硕士生3人。