人纤维蛋白原α链（FGA）在子宫内膜异位症中作用及其机制的探索

Endometriosis (EM) is a common gynecological diseases, of which pathogenesis is not clear. It is reported that endometrial fragments need to go through adhesion, invasion and angiogenesis before planting ectopic lesion formation. Our center has found increasing level of fibrinogen α chain (FGA) in serum of EM patients. We have proven that FGA expression was also elevated in patients’ endometrium, especially in stroma. FGA protein, as a cell adhesion molecule, contains the RGD sequence, and could mediate cell migration and adhesion. A study showed mice with high level of FGA were more easily to form ectopic focus, which could be inhibited by RGD inhibition peptides. Accordingly hypothesis: FGA protein may regulate the expression of some cell adhesion molecules through certain signaling pathway, and promote migration and adherence function of endometrial cells, thereby affecting the development of the EM. In this study, we will establish FGA knock-down/out cell models on the basis of immortalized EM-derived cell line established by our center. Identify the biological properties of established cell models. Explore related extracellular adhesion molecules and signaling pathway. Observe success rate of each animal modele. Screen upstream and downstream targets by Lnc-RNA, gene and protein chips and provide new theoretical basis for the diagnosis and treatment of EM.

子宫内膜异位症(EM)发病机理有多个学说，有研究认为内膜碎片须经粘附、侵袭和血管形成才可在异位种植形成病灶。我中心前期发现人纤维蛋白原α链（FGA）在患者血清中上调；经验证FGA在患者子宫内膜中表达也升高，且间质表达强。FGA含RGD序列，是细胞粘附分子的一种，有介导细胞粘附迁移的功能，文献提示高水平FGA小鼠更易形成异位病灶，外源添加RGD抑制肽可抑制其形成；据报道与细胞粘附相关的PI3K和MAPK等信号通路在EM中过度激活。据此假设：FGA可能通过某种信号通路调节多种细胞粘附分子的表达，促进内膜细胞的粘附迁移，进而影响EM的发生发展。本研究拟在前期建立的EM永生化细胞系的基础上构建FGA敲降/敲除的细胞模型，鉴定后研究细胞生物学特性的改变；探索相关的细胞粘附分子及可能的信号通路，观察对动物模型中病灶形成的影响；应用Lnc-RNA、基因、蛋白等芯片初筛上下游分子，为EM诊治提供新的思路。

子宫内膜异位症(endometriosis, EM)是妇科常见疾病，目前其发病机制学说众多，尚未明确。纤维蛋白原α链（Fibrinogen alpha chain，FGA）是一种含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp）三肽（RGD）序列的粘附分子，可介导细胞与细胞及细胞外基质间的黏附迁移作用，并且具有信号传导的功能。前期研究显示，FGA在EM患者血清中表达显著升高，且在EM 患者在位内膜较正常内膜 FGA 蛋白表达水平高。但FGA与EM的临床相关性和在EM的发病机制中可能的作用有待进一步研究探索。在本课题中，（1）在前期研究基础上，检测了患者在位内膜和异位病灶中FGA蛋白的表达，明确了FGA在位内膜和异位病灶中高表达，与EM疾病的严重程度密切相关，为FGA在EM中作用及其机制研究打下了基础；（2）检测了FGA在EM体外细胞模型hEM15A中对细胞生物学功能的影响，发现FGA表达下调后对细胞的增殖和凋亡无显著影响，而细胞对血管内皮细胞的粘附能力以及其迁移和侵袭明显降低。同时本研究提取患者在位内膜间质原代细胞进行验证，与上述结果具有一致性。（3）预测及验证组织中FGA作用相关分子整合素av、β3及MMP-2的表达，显示整合素av、β3及MMP-2在EM组织中上调，可能与参与EM的发生发展。细胞模型中FGA表达下调后，整合素av、β3表达未改变，而MMP-2表达下调，提示FGA可能通过整合素av、β3结合来调节MMP-2的表达影响EM的发生；（4）探索EM中FGA与整合素av、β3作用的可能的信号通路，发现细胞模型中FGA敲降后，FAK，AKT信号通路激活，而ERK信号通路无影响，提示FGA可能通过RGD序列与整合素结合，活化FAK，激活PI3K/AKT信号转导通路，增强子宫内膜间质细胞的迁移和侵袭能力促进EM的发生发展。这一发现增进了对FGA在EM中生物学功能和作用机制的认识，为EM的治疗提供了一个新的研究方向，具有重要的科学价值和意义。