白色污染源DEHP诱导大鼠生精功能障碍机制研究

环境污染引发雄性生殖功能下降已引起全球高度重视。研究显示白色污染源DEHP与男性生殖功能密切相关。前期研究证实DEHP能引起睾丸生精细胞Bcl-2、Survivin表达异常，提示DEHP能通过影响生精细胞异常凋亡而损伤生精功能。但DEHP究竟如何影响生精功能凋亡机制尚不清楚。本课题拟在前期研究基础上，建立DEHP诱导大鼠不育模型，施以不同干预因素，动态分析检测生精细胞凋亡，Bcl-2，survivin表达改变及甲基化状态，以探明DNA甲基化在DEHP诱导雄性不育过程中的作用，以及叶酸能否干预DEHP诱导的生精细胞损伤，为进一步治疗和预防男性不育，提高人口素质提供科学依据。

本研究通过建立DEHP 诱导大鼠不育模型，明确DEHP 与生精功能的量效关系；监测DEHP 作用于大鼠后大鼠基因组DNA 甲基化状态Bcl-2、Bax基因启动子甲基化修饰及基因表达情况；检测DEHP 作用于体外培养精原干细胞基因组的甲基化状态、Bcl-2、Bax基因启动子甲基化修饰及基因表达情况；.研究证实：.1.DEHP作用于幼年大鼠后,大鼠睾丸生精细胞较正常大鼠减少; DEHP实验组曲细精管上皮明显萎缩,生精细胞减少、间质病理性增生。剂量越高,病理改变越明显。 光镜下对照组精子数目繁多,实验组精子数目稀疏,随DEHP剂量的增加,改变越明显；.2.经DEHP作用后,大鼠生精细胞异凋亡水平增加 ；.3.实验组SD大鼠经过DEHP诱导后,通过检测总蛋白质提取及Western免疫印迹及实时定量 PCR(Real-time Quantitative PCR),发现 :促凋亡基因Bax表达明显升高;.凋亡抑制基因Bcl-2表达明显降低;这可能是导致DEHP诱导雄性SD大鼠生精障碍的主要原因之一。.4.DEHP对睾丸甲基化水平和Bcl-2第一外显子甲基化水平的影响本实验发现DEHP作用于雄性SD大鼠,睾丸组织基因组甲基化水平以及Bcl-2基因外显 子甲基化水平升高。抑制Bcl-2表达,导致Bax/Bcl-2表达失衡。这是导致雄性SD大鼠生 精细胞凋亡增加而致生精功能障碍的关键机制之一。.综合分析体内和体外实验指标，我们明确DNA 甲基化修饰在DEHP 诱导生精细胞凋亡发生过程中的调控作用；揭示了DNA甲基化修饰在DEHP诱导雄性大鼠生精功能障碍中的调控作用，为生物制药靶位选择及临床治疗生精功能障碍提供科学的实验依据。