大黄及其有效成分大黄素促进便秘大鼠结肠运动和粘膜分泌的机制研究

Constipation is believed to be associated with the impaired quality of life,which can be relieved by rhubarb. Enteric nervous system has been reported to regulate the intestinal mucosa secretion through releasing neurotransmitters and affecting histamine release, and histamine can also directly or indirectly influence the release of enteric neurotransmitters. ..Our previous studies showed that emodin is able to induce colonic Cl- secretion and histamine release.However, inhibiting submucosa enteric nervous system with TTX or pretreatment with ketotifen, a membrane stabilizer of mast cells, significantly suppressed emodin-induced colonic Cl- secretion. The excited function of emodin on enteric nervous system and mast cell are direct or indirect? How is the interaction between the enteric nervous system and mast cells activated by emodin? In the present study, the effect of emodin on the colonic ion secretion or smooth muscle motility will be investigated in normal and animal models with constipation by means of short circuit current, or colonic motility recording in vivo or ex vivo.At the same time, the mechanism underlying the regulation of emodin on the enteric nervous system or histamine release is also explored through co-immunoprecipitation, immunoflurorescence, radioimmunoassay,ELESA, HPLC and ect. ..Taking advantage of multidisciplinary approaches, this project may reveal the neuronal immune regulatory mechanism of emodin-induced colonic secretion and motility, and discover the act targets of emodin on the colon, which will provide the significant scientific data and evidences for the treatment of constipation in clinical practice.

便秘是严重影响患者生活质量主要疾病之一,大黄可缓解便秘。肠神经系统可以通过释放促分泌性神经递质以及影响组胺释放调节肠粘膜分泌，组胺也可以直接或通过影响肠神经系统的递质释放间接促进肠粘膜的分泌。我们前期研究发现大黄素具有促进结肠粘膜氯离子分泌和组胺释放的作用,然而阻断粘膜下肠神经系统或应用肥大细胞的膜稳定剂均可显著抑制大黄素的促结肠氯离子分泌的作用。大黄素对肠神经系统/肥大细胞的激动作用是直接还是间接？大黄素与粘膜下神经丛以及肥大细胞之间的相互作用又如何？本项目通过制备大鼠便秘模型，应用短路电流和在体/离体结肠动力记录，结合免疫荧光、放免、酶免\HPLC等测定以及分子生物学等技术深入研究大黄素调控肠神经系统和肥大细胞分泌组胺的机制，以及在介导结肠粘膜分泌以及结肠动力中的作用。本课题发挥学科交叉优势，揭示大黄素促分泌和运动的神经-免疫调控机制，以及作用的新靶点，为便秘治疗提供理论与实验依据。

便秘是影响患者生活质量的常见疾病，并越来越受到重视。大黄在临床上以单方或复方治疗便秘已有几千年历史。目前临床上长期使用大黄治疗便秘往往伴随有一些副作用，使之造成药物依赖，停药后，便秘病情加重，并出现结肠黑变病. .大黄提取液中中的主要成分有大黄素、大黄素甲醚、大黄素葡萄糖。但是大黄素的作用最为明显，而大黄提取液的作用更加持久；对比正常大鼠，服用3g/kg和6g/kg大黄组的大鼠结肠肥大细胞出现聚集现象，并伴随嗜酸性粒细胞的聚集，炎症因子TNF-α、IFN-γ明显升高，而IL-10出现下降趋势，并伴随着粘液的大量分泌，这说明大黄可能作为抗原被肠道识别，引起了炎症反应。. 大黄促进大鼠排便增多且含水量增加；肥大细胞与嗜酸性粒细胞数量增加且出现聚集；促进粘液的分泌，且该作用可被肥大细胞膜的稳定剂酮替芬阻断；使用Elisa检测，发现大黄可以组织胺、PGE2和5-HT的增加，升高IFN-γ的而降低IL-10的作用；便秘模型动物粘膜的杯状细胞酸性粘蛋白含量少，且在粘膜表面附着的粘液保护层减少。.使用透射电镜首次观察到结肠粘膜层与肠道细菌的位置关系，以及黏液内层紧密的粘液结构；观察杯状细胞内不同密度的粘液大颗粒以及粘液出胞的过程；便秘模型动物的结肠内杯状细胞粘液颗粒数减少。.结果提示大黄可以通过刺激肥大细胞聚集并脱颗粒，其中释放的组胺与肠道杯状细胞上的组胺受体结合促进粘液释放，这与大黄通过促进离子分泌引起大量水通过上皮层分泌到肠腔内是相吻合的。但是当服用大黄提取液时时，肠道出现应激反应也会引起粘液的刺激分泌机制，肥大细胞增加、炎症因子升高，抑炎因子IL-10降低这一实验结果提示了我们大黄可能并不完全如研究报道中提到的具有抗炎作用，大黄亦可以引起了肠道的免疫保护；且通过阿尔新蓝染色也可以观察到近端结肠于远端结肠粘液的基础合成有所区别。大黄促进粘液合成反应也不尽相同，接下来需使用肠道灌流系统继续探究近端结肠及远端结肠粘液的分泌状态。