昆虫特异性蝎毒基因的克隆和表达

根据BelT毒素的氨基酸序列，反推出基因的核苷酸序列，合成该基因转化大肠杆菌，酶切鉴定证实确是由36个氨基酸组成的昆虫特异性蝎毒基因BelT1；根据中国马氏钳蝎昆虫毒素BmkiT的氨基酸序列，反推出基因的核苷酸序列，以此序列合成引物，通过PCR扩增，由马氏钳蝎毒腺的总RNA，得到cDNA，得到部分阳性克隆尚待进一步鉴定。将BelT基因连接到双元表达载体pBin19，转化农杆菌LBA4404，将带有蝎毒基因的农杆菌侵染甘蓝下胚轴，进行愈伤诱导以及生根分化，再生出完整植株，提取转基因甘蓝的总DNA和RNA，Southern 和Northern杂交证实蝎毒基因已连接到甘蓝的基因组上，但表达效果尚不理想，需要做进一步的研究工作提高基因表达强度。蝎毒基因转化到了假单孢菌。