人参皂苷Rb1保护肝窦内皮细胞分子机制的研究

肝窦阻塞综合征（HSOS）是造血干细胞移植常见并发症。肝窦内皮细胞（SEC）损伤是HSOS发病的中心环节，寻找有效的SEC保护剂有助于预防HSOS。受损SEC纤溶酶原活化物抑制剂-1(PAI-1)和组织因子（TF）表达增高，后两者受一氧化氮（NO）和转化生长因子β1（TGF-β1）调控。我们研究发现，人参皂苷Rb1对白消安导致的内皮细胞损伤具有保护作用，可增强脐静脉内皮细胞NO合成、降低TGF-β1、TF和PAI-1表达。内皮微粒是内皮损伤－炎症凝血反馈环的重要中间环节，PAI-1能促进其释放。因此我们推断人参皂苷Rb1可能通过增强NO合成、阻断TGF-β1信号通路及抑制内皮微粒生成而发挥SEC的保护作用。本课题拟建立SEC培养和HSOS动物模型，探讨人参皂苷Rb1对SEC的保护作用，从TGF-β1、NO和内皮微粒途径着手进一步研究其作用机制，为开发传统中药有效成分新的药用作用奠定基础。

本项目研究目的在于探讨人参皂苷Rb1对肝窦阻塞综合征（HSOS）的发生是否具有预防作用，探索人参皂苷Rb1保护肝窦内皮细胞的作用机制，为寻找有效的肝窦内皮细胞保护剂提供实验基础和理论依据，对临床有效防治HSOS的发生发展，提高移植患者的生存率有重大临床意义。三年研究工作基本按申请书要求执行。本研究从HSOS动物模型实验、临床实验及体外细胞培养三方面来研究人参皂苷Rb1对HSOS的预防作用，重点从PI3K/AKT/eNOS/NO通路，TF、PAI-1及内皮微粒途径着手，进一步研究人参皂苷Rb1的作用机制。我们成功利用野百合碱建立起SD大鼠HSOS模型，研究人参皂苷Rb1对内皮细胞损伤的保护作用。通过本研究，我们证实野百合碱可诱导内皮细胞的损伤和大鼠HSOS的发生，使内皮保护性因子NO的释放量降低，其上游通路PI3K/AKT/eNOS中相关蛋白合成及表达亦降低，而TF、PAI-1及内皮微粒等相关内皮损伤因子表达增加。人参皂苷Rb1对大鼠肝脏无明显毒副作用，对HSOS的发生具有一定的预防作用，但不能完全阻止HSOS的发生，其作用机制可能是通过调节肝脏PI3K/AKT/eNOS通路和TF、PAI-1及内皮微粒的途径来减少肝窦内皮细胞损伤。我们还发现野百合碱可诱导EA.hy926细胞损伤并使TF及内皮微粒的水平增高，而一定浓度的人参皂苷Rb1预处理后可拮抗上述效应。此外，发现aGVHD移植患者血浆中内皮微粒较健康对照组明显提高，并首次报道了内皮微粒表面表达Fas抗原(Fas+-EMP)，而且发现allo-HSCT病人血浆中sFasL、EMP 、Fas+-EMP/MPs%在aGVHD发生时均显著升高。Fas+-EMP可能通过Fas/FasL途径，参与调节aGVHD相关的内皮细胞的免疫损伤，提示监测sFasL和EMP 有助于早期预测aGVHD，以此为靶点可探索治疗aGVHD的新药。