葡萄果实中单宁缩合酶蛋白纯化及基因克隆

以欧洲葡萄的酿造品种赤霞珠为试材，采用多种柱层析分离技术，纯化出葡萄果实中催化黄烷-3，4-二醇和黄烷-3-醇合成单宁的缩合酶，测定其N端和C端氨基酸序列，利用RT-PCR和RACE技术克隆其全长基因，并进行真核表达及表达后重组蛋白的纯化与鉴定，随后提取纯酶，研究其理化性质、反应动力学、激活和抑制剂，以及该酶在葡萄酒酿造过程中的作用，以揭示葡萄果实中缩合单宁合成的酶学机制；阐述葡萄酒发酵、贮藏和陈酿期间缩合单宁聚合、降解的科学原理。完成该项目，不仅可以在理论上为缩合单宁合成的分子生物学研究奠定物质基础，并对通过基因操作改良品种和完善栽培技术提高葡萄果实加工品质产生重要的理论意义，而且还对果品加工工艺方法和技术参数的优化，特别是葡萄酒酿造工艺具重要的实际价值，同时也将为进一步人工合成缩合单宁类医药产品和植物抗菌剂，中医药和保健产品的生产以及提高作物抗逆性和牧草品种改良提供科学依据。