解析GW112mRNA稳定机制

研究蛋白质与核酸的相互作用对核酸功能的影响是当今生物科学领域的前沿，抗凋亡蛋白GW112是－种胃癌高特异表达的分子。GW112的表达与胃癌癌组织侵润深度、转移度、分化程度明显相关。但其高表达机制尚不清楚。本课题研究GW112mRNA3′不翻译区与蛋白质，尤其是蛋白质核仁素的相互作用，及其相互作用对GW112mRNA稳定的影响。阐明蛋白质包括核仁素稳定GW112mRNA、促进胃癌细胞高表达GW112的机制。从转录后调节的角度为胃癌细胞抗凋亡寻找新的支撑点，为设计胃癌细胞，进而扩展到其他肿瘤细胞生长的抑制剂奠定基础，为胃癌的临床治疗提供新的理论依据。

抗凋亡因子GW112（又称为Olfaetomedin4(OLFM4)），是－种胃癌高特异表达的分子。GW112 的表达与胃癌癌组织侵润深度、转移度、分化程度明显相关。但其高表达机制尚不清楚。本课题利用RNA探针亲和吸附、质谱分析、免疫印迹法、RNA染色质免疫共沉淀以及RNA干扰技术等实验手段，研究GW112mRNA3′不翻译区与蛋白质，尤其是蛋白质核仁素的相互作用，以及GW112与胃癌细胞株SGC-7901和MKN45增殖的关系。得到如下结果：1）用磁珠纯化的蛋白样品经SDS-PAGE电泳后，取目的条带进行质谱分析发现存在核仁素蛋白，以核仁素单克隆抗体进行蛋白印迹（Western blot）验证后发现与质谱结果一致。2）在SGC-7901细胞内，核仁素能与OLFM4mRNA结合，且核仁素对OLFM4具正向调节作用。3）构建的GW112的干扰表达载体pGenesil1.1-siOLFM4转染SGC-7901和MKN45胃癌细胞，能显著降低GW112的表达。4）体内外实验均证明，下调GW112的表达其能明显降低了SGC-7901和MKN45 细胞的OD450值，以及抑制肿瘤的生长。