miR-185抑制前列腺癌细胞中雄激素受体的表达及其介导的信号通路的作用研究

，miR-185作为肿瘤抑制基因，可抑制多种肿瘤细胞生长。本课题组研究miR-185在前列腺癌中的作用时发现，miR-185可下调雄激素受体（AR）表达，抑制前列腺癌细胞增殖。许多研究报道AR在早期前列腺癌及晚期雄激素非依赖性转型中均发挥重要作用。本项目拟选用miR-185前体序列及其抑制序列，分别转染前列腺癌细胞LNCaP-AD（雄激素依赖性）和LNCaP-AI（雄激素非依赖性），检测miR-185对细胞增殖与凋亡、AR表达及其介导的信号通路的影响；并在动物及临床标本中进一步探明miR-185与AR表达及细胞增殖之间的关系；将阐明miR-185通过下调AR表达，抑制多个信号网络途径对AR的激活（包括配体依赖性和非依赖性激活）作用，从而抑制前列腺癌细胞雄激素依赖性及非依赖性生长的作用机制。为临床进一步探讨前列腺癌的分子机制提供实验依据和奠定基础，并为临床晚期前列腺癌的治疗提供新的作用靶点。

雄激素受体（AR）在前列腺癌的发生发展中具有重要作用。目前对晚期雄激素非依赖性前列腺癌仍无有效的治疗方案，设法下调AR的表达、抑制AR的活性及其介导的信号网络途径是前列腺癌治疗的重要环节。研究报道miR-185 在多种肿瘤中发挥抑癌基因的作用，miR-185 在不同的肿瘤细胞中可能通过不同的机制，作用于不同的靶基因抑制细胞增殖，本研究发现miR-185 可抑制前列腺癌细胞增殖，AR是它的重要靶基因，进一步探讨了miR-185下调AR抑制前列腺癌细胞生长的作用机制。本项目的主要研究内容有三部分 1. miR-185 对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响：通过细胞和动物实验，检测miR-185 对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响，细胞实验结果表明：miR-185对雄激素依赖和非依赖性前列腺癌细胞生长都有明显的抑制作用；miR-185可明显促进前列腺癌细胞凋亡。裸鼠移植瘤实验结果表明miR-185对移植瘤生长有明显抑制作用。2. miR-185 对其靶基因AR 转录后负调控：在细胞实验中通过免疫印迹及荧光素酶报告基因检测miR-185 对靶基因AR 具有转录后负调控作用，可下调AR的表达；进一步收集临床前列腺癌标本验证miR-185与AR的表达关系，结果表明在前列腺癌标本中miR-185多为低表达，AR多为高表达，并且miR-185低表达与AR 高表达具有一定相关性 。3. miR-185 对AR 介导的信号网络途径的影响，采用实时定量RT-PCR、免疫印迹及荧光素酶报告基因检测等方法，检测了miR-185通过下调AR蛋白的表达从而阻断AR 介导的信号网络途径，发挥抑制前列腺癌生长的作用。本研究结果表明miR-185通过直接作用于AR-3‘UTR的靶点，转录后负调控AR蛋白的表达，进而阻断AR 介导的信号网络途径，发挥抑制前列腺癌生长的作用，为临床进一步探讨前列腺癌的分子机制奠定了基础并为临床晚期复发的前列腺癌的治疗提供了新的作用靶点。