基于疾病状态下体内过程的莱菔子炮制“生升熟降”药性变化机理研究

The processing of Chinese medicines can change their property. At present, the study is carried out in the normal body with less considering the impact of the disease state.Raphani Semen is the typical “shengshegshujiang” Chinese medicine in the processing.Research team found the stir-frying play a “kill the enzyme and protect glycosides” role in Raphani Semen,moreover the metabolites of the glucosinolates of the roasted Raphani Semen in intra-body is different with the decomposition product of glucosinolates’ lytic enzyme of the raw Raphani Semen.So We use the different metabolism and disposition process in the model animal ‘s body of glucosinolates before and after processing of Raphani Semen as entry point to put forward hypothesis that the different glucosinolates’metabolites in vivo in raw and roasted Raphani Semen is the material basis of “shengshengshujiang” in Raphani Semen’s processing, and the different metabolites have different tendency and distribution in the animal body in disease state,this is the drug-property change mechanisms of “shengshengshujiang” in Raphani Semen’processing.So the project will use the fingerprint spectrum and HPLC-MS technology to research the glucosinolates’dynamic variation rule difference of animal body in disease state before and after Raphani Semen processing,including the intestinal flore’s actions,absorption,disposition,metabolism and pharmacokinetics,reveal the material basis and processing mechanisms of “shengshengshujiang” property change in Raphani Semen processing, and supply the new imitation of research idea and method on the processing changing medicinal property.

炮制可改变中药药性，目前对其研究多在正常机体中开展，较少考虑疾病状态的影响。莱菔子是炮制中 “生升熟降”的典型中药，课题组研究发现炒莱菔子可起到“杀酶保苷”的作用，且炒品中硫苷类成分进入机体后的代谢产物与生品中硫苷分解酶的分解产物不同。因此以莱菔子炮制前后其硫苷类成分在模型动物的体内过程差异作为切入点提出假说：莱菔子生品和炒品中不同的硫苷体内代谢产物是莱菔子炮制“生升熟降”的物质基础，且此不同的硫苷代谢产物在疾病状态下动物体内的作用趋向和分布亦有不同，此为莱菔子炮制“生升熟降”的药性变化机理。本项目拟采用指纹图谱结合HPLC-MS技术，对莱菔子炮制前后硫苷类成分在疾病状态下动物体内的动态变化规律（与肠道菌群的作用、肠吸收成分、血中移行成分谱、组织分布以及药动学）的差异进行比较研究，揭示莱菔子炮制“生升熟降”药性变化的物质基础和炮制机理，也为探讨炮制改变药性的研究思路和方法提供新的借鉴。

炮制可改变中药药性，莱菔子为炮制中“生升熟降”的典型中药，研究表明莱菔子炒制具有“杀酶保苷”的作用，可抑制其所含的硫苷类成分的酶解，但未对其药性变化进行深入研究。本项目围绕莱菔子炮制前后硫苷类成分在模型动物体内过程差异开展研究，以期为揭示莱菔子炮制机理提供依据。为此，主要进行了以下几方面的工作：采用HPLC-DAD指纹图谱和HPLC-MS/MS技术，研究了生、炒莱菔子的化学成分的差异以及莱菔子炮制前后成分的变化规律；莱菔子炒制前后特征成分的分离和鉴定；比较了生、炒莱菔子化学成分的肠内菌代谢产物、肠吸收、体内代谢差异；比较了生、炒莱菔子原型\代谢产物的组织分布差异；炒莱菔子萝卜苷的药代动力学研究。通过以上工作，得出结论如下：莱菔子炒制使黑芥子酶失活，抑制硫苷类成分的酶解，生莱菔子中硫苷类成分能被黑芥子酶酶解，其酶解产物不稳定会进一步转化。而莱菔子炒制前后其所含的芥子碱硫氰酸盐含量无显著变化。采用离子交换树脂对特征成分萝卜苷进行纯化制备；在肠道菌群的作用下，炒莱菔子中萝卜苷被还原，芥子酸糖苷类成分被水解和异构化，生莱菔子因萝卜苷被酶解，主要是其酶解及转化产物被还原和分解，其与炒莱菔子存在差异。生炒莱菔子中吸收入血成分、粪便和尿液代谢产物存在较大差异，炒莱菔子中萝卜苷在体内代谢与体外酶解反应基本一致；生、炒莱菔子中各原型\代谢成分的组织分布未发现明显趋向差异。对炒莱菔子萝卜苷的药代动力学研究发现萝卜苷在体内可能存在肝肠循环，推断萝卜苷在体内肝药酶作用下会发生类似体外的酶解反应。本课题创新性的从体内过程差异角度阐明莱菔子炮制“生熟异治，生升熟降”的药效物质基础，初步解析了莱菔子炮制机理，丰富炮制改变药性理论，为制定莱菔子饮片的炮制工艺和专属性质量标准提供科学依据。