溃疡性结肠炎患者结肠粘液脱糖基细菌的研究

Based on facts that disequilibrium of intestinal microflora of UC patients,decreasing numbers of goblet cells in mucosa, mice with the gene mutation of glycosylase enzyme suffering from spontaneous colitis similar to human UC,verifying the evidence of deglycosylation in colonic mucus of the UC patients,we.hypothesis-that the major component of mucin(MCU2) are deglycosylated ,so that the sugar chain linked with serine/threonine on the peptide backbone become shorter or disappeared.After that,the colonic mucus layers have been damaged which have no ability to prevent the noxious substance of colonic contents from entering the mucosal epithelial layer.The study will prove the relationship between bacterial deglycosylation and UC by detecting the relationship between the extent of MUC2 deglycosylation in the UC patients'mucus and disease,the number of bacteria in mucus,the thickness of mucus,and the bacteria which can deglycosylate.Then bolt these bacteria, search for the other bacteria interacative with them,prove the clinical significance in the patients,and find the etiopathogenisis of UC.

基于UC患者肠道存在菌群失调，粘膜组织中杯状细胞减少。糖基化酶基因缺陷鼠发生类似于人UC结肠粘膜炎症和我们发现UC结肠粘液脱糖基现象。本项目假设：UC患者粘液中主要成分粘蛋白MUC2在细菌的作用下脱糖基致糖链缩短或消失，粘液屏障受损。肠内容物中有害物质透过粘液层与粘膜上皮接触，产生粘膜炎性损害。本研究通过检测UC患者粘液中MUC2脱糖基的程度与病情的关系，粘液中细菌数,粘液厚度以及脱糖基的细菌，证明细菌脱糖基与UC的关系。从粘液中筛选出脱糖基的细菌，寻找与该菌相互作用的细菌。在患病人群中验证该菌的临床意义。最终找出UC的病因。.关键词：溃疡性 结肠炎 粘液 脱糖基 细菌

目的：通过改变高蛋白和高纤维给予的顺序，进一步判断高蛋白和高纤维对溃疡性结肠炎的作用机制.方法： 60 只3-4 周Balb/c 雌性小鼠，分别给予标准、高蛋白和高纤维饲料干预4 周后，高蛋白和高纤维组中各选10 只互相更换饮食，继续饲料4 周，用2.5%DSS 自由饮用7 天。比较小鼠一般情况、体重、血便、大便性状、DAI 评分、病理组织评分。运用Realtime-PCR 技术比较各组小鼠IL-1β和IL-6 在结肠组织中的表达，从而判断饮食对各组小鼠实验性结肠炎的影响。.结果：高蛋白饲料组和高纤维饲料+高蛋白饲料组小鼠临床症状、病理损伤重，以高蛋白饲料组最明显，体重下降最显著，血便量最多，结肠病理损伤最明显。高纤维组饲料和蛋白饲料+高纤维饲料组症状较轻，部分小鼠出现隐血，体重轻微下降，病理损伤最轻。小鼠高蛋白饲料组结肠长度明显低于其他各组，空白对照组与高纤维、高蛋白+高纤维饲料组以外各组均有差异（P<0.05）。DAI 评分高纤维饲料组与高蛋白+高纤维饲料组外的其他各组均有差异，高蛋白组与其他各组均有差异，P<0.05。IL-1β在高蛋白饲料组和高纤维+高蛋白饲料组无明显统计学差异，都高于高蛋白+高纤维饲料组和高纤维饲料组，具有统计学差异，P<0.05。而高蛋白+高纤维饲料组和高纤维饲料组之间无统计学差异，P>0.05。IL-6 在高蛋白饲料组和高纤维+高蛋白饲料组无明显统计学差异，都高于高蛋白+高纤维饲料组和高纤维饲料组，P<0.05。而高蛋白+高纤维饲料组和高纤维饲料组之间无统计学差异，P>0.05。各组之间muc2、TLR4 和TLR5 的mRNA 表达量没有统计学差异，P>0.05。TLR2 在高糖组明显高于其他各个组，且具有统计学差异，P<0.05。而高蛋白饲料组与高纤维饲料组间无统计学差异，高蛋白+高纤维饲料组与高纤维+高蛋白饲料组间无统计学差异，P>0.05。.结论：高蛋白饲料加重DSS 诱导的实验性结肠炎，高纤维饲料起到保护作用。本实验中不同饮食对实验性结肠炎的影响并不是通过影响肠道粘膜免疫系统的发育，也不是通过影响muc2、TLR2、TLR4 和TLR5 的表达来实现的。