失巢凋亡抗性相关microRNA分子群在食管腺癌转移过程中的作用及其调控机制研究

miRNA分子广泛参与了肿瘤侵袭转移过程中基因表达的调控。然而，miRNA分子在肿瘤细胞失巢凋亡抑制及相关转移中的作用及其调控机制研究国内外还未见报道。前期，我们利用动物及细胞模型筛选了三个可能与食管腺癌失巢凋亡抑制有关的miRNA分子，分别是上调表达的miR-21，下调表达的miR-26a和miR-145。本项目拟应用功能试验进一步探讨目标miRNA分子在食管腺癌细胞失巢凋亡抑制及相关转移过程中的作用；应用Affymetrix GeneChip? miRNA Array系统及生物信息学分析等寻找其可能调控靶基因及相关信号通路，报告基因试验及Western blot等鉴定；干预目标miRNA表达，利用动物模型观察其对食管腺癌细胞失巢凋亡抑制相关转移恶性生物学行为的影响。本研究将从一个全新层次和角度探讨食管腺癌转移机制，为预防食管腺癌转移发生、分子分型及选择合适治疗靶点提供实验和理论基础。

为阐明microRNA（miRNA）分子在肿瘤细胞失巢凋亡及相关转移中的作用及调控机制。构建了食管腺癌细胞失巢凋亡抑制模型及裸鼠体内转移模型，然后应用miRNA芯片技术筛选可能参与食管腺癌细胞失巢凋亡抑制及相关转移调控的miRNA分子。在临床标本中利用qRT-PCR法对miRNA芯片结果进行验证，应用miRNA模拟物或抑制剂瞬时转染细胞，以上调或下调miR-26a在食管腺癌OE33或OE33/AR细胞中的表达水平，观察其对细胞周期、失巢凋亡、转移及药物敏感性等肿瘤细胞恶性表型的影响。进一步利用生物信息学网站和靶基因预测软件寻找miR-26a可能调控的靶基因，双荧光素酶报告基因实验对候选靶基因进行验证， 应用免疫共沉淀、Western blot等对靶基因相关信号通路进行验证。结果表明miR-26a表达水平下调与人食管腺癌的发生及转移有关， 体外实验证实miR-26a直接参与食管腺癌细胞周期及失巢凋亡表型的调控。在食管腺癌细胞中，miR-26a下调致Rb1蛋白水平增高，由此通过抑制E2F1的功能而影响细胞周期及凋亡等表型。结果提示miR-26a通过调节Rb1/E2F1信号途径参与食管腺癌细胞周期及失巢凋亡等表型的调控。