宿主蛋白RPNⅠ作为HCV组分调控病毒组装与入胞的机制研究

The unclear molecular mechanism of Hepatitis C virus(HCV) infection primarily hampers the development of its new strategy of treatment. As an important process of virus infection, the research of molecular mechanism of HCV assembly is extremely urgent and necessary. HCV assembles in endoplasmic reticulum(ER). Our previous results had showed that ①ER protein ribophorinⅠ (RPNⅠ) existed in serum of infected patients and HCV particles (JFH-1) cultured in vitro, and become a component of it. And ② RPNⅠas a part of HCV was located on the surface of the viral envelope protein.It is also reported that RPN I has interaction with Yellow head virus and other virus.Therefore, we put forward the new hypothesis that “host protein RPNⅠ could become a part of HCV during the process of assembly, and possibly it participates in the assembly and entry such infection process through the formation of a complex with viral component envelope protein”. Thus on the previous foundation, we will study the function of RPNⅠ in HCV assembly and entry, the interaction between RPNⅠ and HCV, its molecular mechanism of regulation, and the effect of RPN I on the therapy of HCV by using HCV infected patient samples and cell culture model in vitro through interference and overexpression, protein immunoprecipitation, etc. It will provide new theoretical foundation and strategy for Hepatitis C treatment.

丙型肝炎病毒（HCV）感染分子机制的尚未明确，在根本上制约着其治疗新策略的发展。HCV组装是病毒感染的重要环节，其机制研究十分迫切而必须。HCV组装发生在内质网，我们前期研究发现，①内质网蛋白核糖体结合蛋白Ⅰ（RPNⅠ）存在于感染病人血清和体外培养的HCV粒子（JFH-1）上，成为HCV组分，②RPNⅠ作为HCV一部分，定位于病毒囊膜蛋白的表面，且有文献报道表明RPNⅠ与黄头病毒等有相互作用。因此，我们提出“宿主蛋白RPNⅠ在HCV的组装中成为病毒一部分，可能通过与囊膜蛋白等病毒自身蛋白形成复合体，参与病毒组装、入胞等感染过程”的新假说。本项目基于前期研究结果，拟结合临床HCV感染病人标本及细胞模型，通过干扰及过表达、蛋白免疫共沉淀等方法，进一步研究RPNⅠ在HCV组装、入胞中的功能、相互作用及其分子调控机制，探讨RPNⅠ对HCV治疗效果的影响，为丙型肝炎的治疗提供新的理论依据和策略。

丙型肝炎病毒与宿主相关蛋白发生相互作用，在内质网上进行复制。其中，宿主细胞内质网重要的功能蛋白核糖体结合蛋白Ⅰ（RPNⅠ）与HCV的相互关系及其调控HCV复制的分子机制，目前全然未知。为了验证“宿主蛋白RPNⅠ可以在HCV的组装过程中成为病毒一部分，并可能通过与囊膜蛋白等病毒自身蛋白形成复合体，参与病毒组装、入胞等感染过程”这一新假说。本项目通过临床HCV感染病人标本和细胞培养模型，探讨RPNⅠ在HCV组装、入胞中的功能及其分子调控机制。已完成项目书所有研究内容和达到研究目标，建立了丙型肝炎病毒（HCV）体外无血清培养系统，创新性研制了肝素亲和层析和磁珠分离两种HCV纯化方法；首次在HCV感染病人血清和体外病毒模型发现并证实细胞宿主蛋白RPNⅠ与HCV的相互结合且存在于病毒表面，揭示RPNⅠ可以在HCV的组装过程中成为病毒一部分；发现了HCV复制不影响宿主内源RPNⅠ表达含量，但是过表达RPNⅠ会促进HCV的表达，同时干扰RPNⅠ显著抑制HCV的感染，RPNⅠ对于HCV复制必不可少；首次探明了RPNⅠ是通过与病毒囊膜蛋白E1和E2相互作用、进而调控ApoE的表达参与病毒组装、入胞过程这一分子机制。本项目的完成明确了RPNⅠ与HCV复制的关系及RPNⅠ在病毒组装入胞中的作用及分子机制，提供RPNⅠ的新分子靶点，对推动研发HCV新的靶向治疗技术具有重要的临床实践意义。本项目完成了预期研究成果及各项主要考核指标，已发表标记本项目资助的SCI研究论文2篇（均为第一标记），尚有1篇英文论文目前正在投稿中；在项目支持下，协助培养了3名硕士研究生。在项目执行期间，本课题主持人因该项目执行良好，获惠州市医学科技奖-青年专家精益奖。